λ噬菌体的大规模培养(低倍数感染)实验

实验方法原理 λ 噬菌体的大量制备可通过低倍数感染细菌培养物或高倍数感染这两种方法获得。低倍数感染后，培养物立即被转接至大体积培养物中。因为在最初细菌培养物中只有小量的细胞被感染，所以转接后的细菌培养物中的未感染细胞在随后的数小时内将进一步分裂生长。

实验材料 λ 噬菌体原种

试剂、试剂盒 氯仿SM

仪器、耗材 NZCYMSorvall SS-34或相当型号

实验步骤

一、材料

1. 缓冲液和溶液

氯仿，SM。

2. 培养基

NZCYM

3. 离心机和转子

Sorvall SS-34或相当型号。

4. 载体和菌株

高滴度的 λ 噬菌体原种

二、方法

1. 接种大肠杆菌适宜菌株的单菌落至分装在 500 ml 锥形瓶的 100 ml NZCYM 中，37℃ 剧烈振荡培养过夜。

2. 测定培养物的 OD600 值，以 1OD600=1X109 个细胞/ml 计算细胞浓度。

3. 取 4 份样品，每份含 1010 个细胞，4000 g ( 5800 r/min Sorvall SS-34 转子）室温离心 10 min，去上清。

4. 将每份细菌沉淀用 3 ml SM 悬浮。

5. 加入适当数量的感染性噬菌体颗粒，振荡使噬菌体充分分散于整个培养物中。

6. 将感染培养物 37℃ 温育 20 min，间或摇晃。

7. 将每份感染样品加入到预热至 37℃ 的 500 ml NZCYM（于 2 L 烧瓶中），37℃ 剧烈振荡培养（300 r/min)。

8. 8 h 后开始监视培养物的裂解情况。伴随着细菌和噬菌体的生长，8~12 h 后裂解发生。假如观察到裂解发生，转入步骤 10。

9. 假如 12 h 后裂解不明显，取小量培养物样品，检査噬菌体的生长情况。

(1) 取两份感染培养物样品（每份 1 ml ) 至玻璃试管中。

(2) 每管中加入 1 至 2 滴氯仿（约 50~100 ml )，37℃ 培养 5~10 min，间或摇晃。

(3) 将两管置光线下比较培养物的外观。如果接近完全感染但细胞还没有裂解，氯仿将导致细胞破裂，从而使混浊的培养物变为透明。在这种情况下，转入步骤 10。

10. 每个烧瓶中加入 10 ml 氯仿，37℃ 继续振荡培养 10 min。

11. 将培养物冷却至室温，随之沉淀噬菌体颗粒。