菌脂多糖的制备
实验概要
脂多糖是革兰氏阴性细菌细胞壁的组成成分，所以抗脂多糖抗体的制备可用革兰氏阴性细菌菌体抗原来制备，因此这里只介绍几种细菌脂多糖提取的方法。
实验原理
热酚提取法的原理是将细菌悬液加于热酸——水混合液中，冷却，离心混合液可分为水溶液层，内含水溶性脂多糖及核酸等及酸层、内含蛋白质。近年来发现在酸层中也含糖类。经离心后沉淀含细胞残体。
主要设备
高速离心机，水浴锅，冰箱，试管，超声仪，透析袋等。
实验步骤
1. 热酚提取法：
1) 细菌浓悬液用盐水经2500转/分，20分钟离心洗涤一次。
2) 将沉淀的菌混匀于蒸馏水中，放66℃水浴，然后滴加等量的90%热酚溶液(预热至66℃)，边加边摇，而后在66℃水浴中搅拌25分钟。
3) 在水浴中冷却，于4℃冰箱过夜。
4) 以2000转/分离心15分钟。
5) 将上层水溶液吸到另一试管中。
6) 剩下的酚层及残渣组分可再加上述同量水在热水浴中搅拌30分钟，冷却，离心，取上层水溶液。将两次提的水溶液混合，置透析袋中于生理盐水中透析2天，其间换几次盐水，以除去酚。
7) 透析后的水溶液层经浓缩(如用聚乙二醇在透析袋外层涂抹以除去水分)。即成粗制脂多糖，于冰箱内保存备用。
2. 超声波处理法
1) 获得的菌液经2500转/分，20分钟离心洗涤1—2次，将沉淀配成2倍于湿菌浓度的浓菌液。
2) 用超声波发生器中频(约相当于12000cps)处理20分钟。
3) 处理液经3000转/分，离心30分钟，吸取上清液即为脂多糖抗原。置4℃冰箱保存备用。
3. 煮沸法
将培养后得到的浓菌液沸水浴煮沸2小时。置冰箱静置两星期以上(使菌体残渣自由下沉)。3000转/分离心30分钟，取上清夜即为粗脂多糖抗原，置冰箱中保存备用。
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