放射免疫分析的原理详述（一）

　　竞争性RIA，又称传统RIA

　　主要特点：标记的是抗原。其原理：未知抗原Ag+标记抗原Ag +已知定量抗体Ab标记抗原与抗体复合物AgAb+未知抗原与抗体复合物Ag Ab+游离标记抗原Ag （去除）（未知抗原多，标记抗原与定量抗体结合的复合物就少，表现为负相关）。

　　临床上甲胎蛋白（AFP），癌胚抗原（CEA），8 一微球蛋白（pz—MG ），铁蛋白（Fer），人绒毛膜促性腺激素p亚单位（HCG-13）等的检测都是竞争性RIA法原理。竞争性RIA法，根据加样顺序与温育次数的区别，反应方式分三种：平衡法，将非标记抗原（被测物与标准品）、抗体、标记抗原依次加入反应管，混匀后一次性温育至反应达到动态平衡，再加分离剂分离B（复合物）与F（游离物）如：AFP，8 一MG，Fer；顺序加样法，先将非标记抗原（被测物与标准品），与抗体在反应管内作第一次温育，待反应达到动态平衡后。加入标记抗原，再作第二次温育后，分离B与F如：CEA；急诊检测法：为临床急需检测结果而提出的反应方式，不等RIA 反应达到动态平衡就终止反应；分离剂的选择有，PEG（聚乙二醇），第二抗体等。

　　现在一般采用的是：第二抗体与PEG合用的方法，称为双抗体一PEG法。

　　PEG原理：PEG浓度达到7 一9 时能使抗原一抗体复合物沉淀。

　　优点：经济，简便，通用。

　　缺点：重复性差，非特异性结合率高。

　　第二抗体：第一抗体是可与被测抗原进行特异结合的抗体，来自家兔或豚鼠。用第一抗体为抗原，作用到羊，马身上，产生的抗第一抗体的抗体称第二抗体。第二抗体与第一抗体在适当条件下发生特异性结合，生成分子量很大的免疫复合物（AgAb ×Ab ），能自然沉淀。

　　优点：分离效果好。非特异性结合率低。

　　缺点：增加经费投入。需要第二次温育，延长了时间。

　　所以就产生了两者合用的双抗体一PEG法，它结合了上述两种方法的优点。