关于甘露庚糖醇的合成方法介绍

　　方法一、提取法

　　浸泡、碱炼、酸化：在洗藻池中放约2-3t自来水，投入120kg海藻，至藻体膨胀后，仔细地把海藻上的甘露醇洗入水中，洗净的海藻供提取海藻酸钠用。洗液再洗第二批海藻，如此约洗四批。将上述洗液加300g/L(30%)氢氧化钠液，PH10-11，静置8h，待褐藻糖液、淀粉及其他有机黏性物充分凝聚沉淀。虹吸上清液，用硫酸(1：1)酸化，调节为pH6-7，进一步除胶状物，得中性清液。海藻或海带[自来水]→洗液[NaOH]→[pH10-11, 8h]上清液[硫酸]→[pH6-7]中性清液。

　　浓缩、醇洗：将上述中性清液用直火或蒸气加热至沸腾蒸发，温度110-115℃，大量氯化钠沉淀，不断将盐类与胶污物捞出，直至呈浓缩液，取小样倒地上，稍冷却应凝固，此时放料，含甘露醇30%以上，水分约含10%。将浓缩液冷至60-70℃，趁热加95%乙醇(2：1)，不断搅拌，渐渐冷至室温后，离心甩干除去胶质，得灰白色松散物。中性清液[110-115℃]→浓缩液[乙醇]→[60-70℃]松散物 。

　　提取 称取松散物，装入备有回流冷凝管的提取锅内，加8倍量的94%乙醇，搅拌，缓慢加热，沸腾回流30min出料，流水冷却8h，放置一昼夜，离心甩干，得白色松散甘露醇粗品，含甘露醇70%-80%。同上操作，乙醇重结晶1次，得工业用甘露醇，含量90%以上，Cl-含量<0.5%。松散物[94%乙醇]→[回流30min, 冷却8h]。

　　粗制甘露醇 精制 取工业用甘露醇加蒸馏水加热溶解，再加入1/10-1/8药用活性炭，不断搅拌，80℃保温半小时，趁热过滤，少许水洗活性炭2次，合并洗滤液，浓缩至甘露醇达70%时，如有浑浊，重新过滤。在搅拌下冷却至室温，结晶，抽滤，洗涤结晶，抽滤至于，得结晶甘露醇。

　　粗制甘露醇[蒸馏水，活性炭]→[80℃, 30min]浓缩滤液→结晶甘露醇；结晶甘露醇[105-110℃, 4h]→药用甘露醇成品。

　　注射液的制备：甘露醇成品按剂量溶于注射用水成溶液，经灭菌等得甘露醇注射液。

　　甘露醇成品[注射用水]→甘露醇注射液

　　方法二、直接发酵法

　　选育菌种 将Aspergillus Oryzae3.409菌种，移植于盛有10ml斜面培养基(麦芽汁中加入2.1%琼脂)试管中在31℃培养4d。得斜面菌种。菌种保藏系用低温保藏法，置斜面菌种于4℃冰箱中，保存2-3个月传代一次，使用前需要重新转接培养活化，以保证发酵。

　　米曲霉素[菌株斜面培养基]→[31℃, 4d]斜面菌种

　　种子培养 取培养4d的菌种麦芽汁斜面2支，移植于17.5L种子培养基中。

　　种子培养基的配制：硝酸钠0.3%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.05%，氯化钾0.05%，硫酸亚铁0.001%，玉米浆0.5%，淀粉水解糖2%，玉米粉2%，初pH6-7。

　　通气量1：0.5V/(V·min)，温度31℃±1℃，350r/min搅拌，罐压98.1kPa培养20-24h，得种子培养液。

　　斜面菌种[种子培养基]→[pH6-7, 31℃, 20-24h]种子培养液。

　　发酵 发酵培养基的配制：硝酸钠0.3%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.05%，硫酸亚铁0.001%，玉米浆3%，玉米粉3.5%，淀粉水解糖12.5%，初pH6-7。

　　取350L发酵培养基放人600L的发酵缸中，以146.15kPa ，蒸气灭菌30min，移入种子培养液，接种量5%，罐压98.1kPa，通气量 1：0.3V/(V·min)，发酵培养20h后，改为1：0.4V/(V·min)，温度30-32℃，搅拌230r/min，发酵周期4-5d。为防止产生泡沫，在配料时加豆油200ml。所得发酵液中含甘露醇5%以上，转化率40%。

　　种子培养液[蒸气]→[pH6-7, 30-32℃, 4-5d]发酵液。

　　凝固蛋白、浓缩、结晶、脱色、脱盐 将发酵液加热100℃，5min，加1%活性炭80-85℃，30min，过滤或甩干，得澄清液。再将澄清滤液在50-60℃真空浓缩至31°Be，在室温下放置24h，甩干得甘露醇结晶。把结晶溶于0.7倍水中，加活性炭2%，70℃加热30min脱色，过滤。滤液通过717强碱性阴离子交换树脂(OH-型)和强酸性阳离子交换树脂(H+型)2：1混合床树脂进行脱盐，检查流出液无氯离子反应。

　　发酵液[1%活性炭]→[100℃, 5min； 80-85℃, 30min]澄清滤液[55-60℃]→[减压]粗制品[水，2%活性炭]→[70℃, 30min]滤液[阴阳混合床树脂]→流出液

　　浓缩、结晶、烘干 流出液用蒸气在55-60℃，80kPa(600mmHg)减压浓缩至25°Be，浓缩液放冷至室温24h结晶，甩干，置105-110℃烘干，粉碎得药用成品，收率60%，含量98.83%-100.9%。

　　流出液[55-60℃]→[减压]浓缩液[室温]→[24h]结晶[105-110℃]→原料药

　　制剂 取适量注射用水，加热至90℃左右，按20%含量称取甘露醇，使之溶解，加活性炭水浴加热5min脱色，布氏漏斗过滤，再补加注射用水至全量。测定含量及pH合格后，用G3垂熔玻璃滤球滤至澄明，分装于50ml、100ml或250ml的安瓿或输液瓶中，以98.1kPa热压蒸气灭菌40min，得甘露醇注射液。