应用：全二维液相色谱串联质谱分析不同产地甘草样本
二维液相色谱(2D-LC) 是将两种分离机理不同而又相互独立的液相分离模式串联起来构成的分离系统。该研究中作者等人收集了来自不同产地的甘草样本，建立了全二维（LCxLC）分析方法，采用二极管阵列检测器和质谱检测器，经过方法优化，采用HILIC色谱柱作为第一维色谱柱，反相液相色谱柱作为第二维色谱柱。这种组合展现出了强大的分离能力，共鉴别分析了89种甘草中的化合物（UV、分子量和特征二级质谱数据分析）。通过测定不同产地甘草样本中的化合物，发现了19到50种差异化合物，成功的对不成产地的甘草样本进行了鉴别。
NPLCxRPLC、SECx RPLC 、IECxRPLC均会导致溶剂不兼容情况，采用HILICxRPLC二维方法对于分析酚酸类化合物（phenolic compounds）十分有效，采用二极管阵列检测器和质谱检测器检测二维色谱峰的相对位置，可以很好地鉴定甘草中的酚酸类和皂苷类成分。
图1 第一维液相色谱柱选择（A:Silica column; B: Diol column; C:ZIC-HILIC column, 280nm）
第一维色谱柱的选择见图1，作者等人试验了三种不同类型的HILIC色谱柱（silica, diol和 ZIC-HILIC 色谱柱），最终选择采用微内径ZIC-HILIC色谱柱作为第一维色谱柱，选择C18色谱柱作为第二维色谱柱。采用2位，10通系统实现全二维色谱切换，定量环体积为30μL，切换时间为1.3min . 第一维流速为15μL/min，第二维流速为3mL/min。
图2 全二维化合物分布图及第二维梯度洗脱条件优化
较早出峰的为极性较小的酚类化合物（黄酮、黄酮烷类、异戊烯基黄酮、异黄酮等），后出峰的为极性较大的三萜皂苷类化合物，作者等人对第二维洗脱梯度进行了优化，最终选择了分段梯度洗脱模式，使化合物在二维图上的分布更加均匀，有效峰容量增加，结果见图2.
通过该方法对产地来源于中国、伊朗、意大利、阿塞拜疆的甘草样品进行分析，见图3. 并通过二级质谱分析了各类化合物的裂解规律，通过分子量和特征二级质谱数据共鉴别分析了89种甘草根中的化合物，图4为各类化合物质谱二级裂解总结。
图4 甘草样本中部分化合物的结构和二级质谱图（A:liquiritigenin, B:licorice glycoside A, C:licorice glycoside B, D:liquiritin apioside）
作者等人对于不同产地甘草样本中差异化合物进行分析，不同产地样本中的差异化合物见图5. 总共发现了19到50种差异化合物，成功的对不同产地的甘草样本进行了鉴别。
图5 不同产地甘草样本中差异化合物全二维色谱分布图
