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免疫胶体金银细胞化学染色中固定剂选择

2018.3.16

免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否适当,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使后续的染色成功成为可能,其次要用高特异性和高效价的一抗,选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同。因此,不可能有一种适用于所有抗原的固定剂,而是根据不同的抗原性质区别对待。根据我们使用的固定剂介绍如下,仅供参考。

1、固定剂的选择及其相应的固定时间

(1)酶:冰冻切片不固定,或用95%乙醇,固定时间为10min。

(2)激素:冰冻切片、涂片、印片,不固定或丙酮、甲醇、乙醇、PEG固定。固定时间为4℃*30min。

(3)免疫球蛋白:中性福尔马林、四氯化碳(1%甲醛),固定时间为30min。 

(4)白蛋白:95%乙醇含1~5%冰醋酸。固定时间为30min。

(5)纤维蛋白原:95%乙醇含1%~5%冰醋酸。固定时间为30min。

(6)病毒:丙酮、100%乙醇、甲醇、乙醚。固定时间为30min。

(7)糖蛋白:PLP、丙酮。固定时间为30min。

(8)脂质: Forssman 中性福尔马林。固定时间为20min。 

(9)抗原: 2.5%硫代硫酸钠,冰冻切片不固定。固定时间为20min。

(10)免疫电镜:PLP、戊二醛、戊二醛-多聚甲醛、ECD-G等。固定时间为30min。

2、切片的处理与粘附

免疫组化染色过程较复杂,洗涤的次数较多,而且均需振荡洗涤,抗原片粘贴不牢,往往在最后的时刻,还没有等显色就会脱落导致前功尽弃,这个环节虽小却会影响大局。因此,为了保证切片染色成功,必须把切片处理好,解除脱片的后顾之忧。


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