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荧光串色问题

2018.8.21

当对两种或两种以上荧光染料标记的样品进行成像时,最常见的问题就是荧光串色问题。例如,当用传统的绿色和红色荧光探针荧光素和罗丹明进行双标时,串色只有用最优的荧光滤色镜组才能降低,但绝不会完全去掉。这是因为这样一个事实:这些染料都有很宽的吸收和发射光谱,光谱之间有明显的重叠。因此,激发荧光素的氩离子激光器的 488nm 线也能激发罗丹明,尽管激发程度较低。而且,在为罗丹明预设的光电倍增管通道或宽场滤色镜套组中也会检测到荧光素的荧光发射,甚至在没有共定位的地方,产生看起来是黄色或橙色的像素。要用这些染料或类似染料进行共定位实验时,串色问题必须完全消除。

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