1. 将铝箔铺在软木板上。
2. 将主动脉（新鲜猪主动脉：如条件允许，需无菌取材。放入 HBSS/PSGA 中转运）放于 70 % 乙醇浸泡的棉纸上面，然后轻拍动脉以吸干表面的液体。
3. 在铝箔覆盖的软木板上，修剪主动脉周围组织，只保留分支。不要将分支剪得过短。
4. 用线结扎分支，夹住主动脉细端。
5. 注入 D-PBSA，将主动脉充满，然后夹住主动脉上端。
6. 用无菌鳄鱼夹将漏液处夹闭。
7. 吸出 D-PBSA。
8. 用温胶原蛋白酶（胶原蛋白酶H : 同 HUVEC 分离方法中的材料，50 ml）液充满主动脉，然后夹闭动脉。用乙醇喷过的塑料薄膜包裹主动脉，在 37°C 条件下放置 8 min。
9. 轻轻按摩主动脉，使内皮细胞脱落。
10. 让主动脉中的胶原蛋白酶液流人盛有 5 ml FBS 的 50 ml 试管。
11. 用冰冷的 D-PBSA 充满主动脉，随后夹闭动脉。按摩后让 D-PBSA 流入步骤 10 中用的试管。然后，重复此步骤一次。
12. 在 4°C 条件下离心（500 g，6 min）。
13. 用 5 ml 培养液混悬细胞，将细胞悬液注入 25 cm2 培养瓶，在 37°C 条件下培养过夜。
14. 第二天吸去培养液。
15. 用 D-PBSA 洗细胞 2 次，然后加入培养液。
维持培养
16. 每周换培养液 3 次。如果细胞单层不足 50 % ，只换一半培养液。若细胞单层达 50 %~80 % ，换全部培养液。
17. 当细胞单层达 80 % 时，用胰蛋白酶和 EDTA 混合液消化，按 1 : 3 传代。
18. 不要使用超过 7 代的细胞。 展开 | 
