诱饵蛋白特性鉴定实验
基本方案
| 实验材料 | 蛋白质 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | CM培养基 |
| 仪器、耗材 | 水浴锅 培养箱 电转仪 |
| 实验步骤 |
一、lacZ激活试验
1. 采用标准的亚克隆技术，将编码目的蛋白质的DNA插入pEG202的多接头中，构建一个符合读框的融合蛋白。
5. 将一块尼龙膜轻轻地放在含酵母菌的平板上，待其完全浸湿后取出，尼龙膜在空气中干燥5 min，将沾有菌落的一面朝上，于-70℃冷冻10 min。
二、抑制试验
7. 将以下组合的质粒分别转化酵母菌EGY48
图一、pEG202 LexA-融合质粒
10. 通过液体检测试验（使用Gal/CM 省却成分培养基），复印膜分析，或结合两种检测方法。检测3组转化酵母菌株中的β-半乳糖苷酸活性（实验组，阳性对照组，阳性对照组）。
三、LEU 2 试验
11. 取一个转化pBait和pSH18-34报道质粒的EGY48酵母菌单菌落，分散于500 μl 无菌水中，取出其中100 μl 稀释在1 ml 无菌水，并用无菌水作1/10倍比连续稀释至1 000倍。
12. 从每一个稀释浓度各取100 μl 分别涂布Glc/CM-Ura-His 省却成分培养基平板和Glc/CM-Ura-His-Leu 省却成分培养基平板，于30℃培养过夜。
13. 选择能作为相互作用阱进行文库选择的克隆；合适的pBaits 应不能激活lacZ 和leuZ 报道基因，要求产生的β-半乳糖苷酶活性比JK101+pRS423 低，与JK101+RFHM1 相当。pBaits 具有较低的激活活性可能也适用的，如pBaits 具很强的激活活性，应该加以截短。
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技术原理
