B-hCD3E人源化小鼠的百变基因编辑策略

由于CD3与T细胞的激活密切相关，因此，对于该靶点的抗体研发层出不穷，其中包括CD3E单特异性及双特异性抗体。基于此，百奥赛图开发了CD3E人源化小鼠（ B-hCD3E mice ），用于各类抗体的体内药效评价。

B-hCD3E mice数据内容包含：
 

基因编辑策略

纯合小鼠人源CD3E蛋白流式表达分析

纯合小鼠T细胞激活功能流式分析

CD3E单特异性抗体体内药效评价及给药后T,B细胞清除流式分析

Blinatumomab双抗体内药效评价

CD3E 双抗体内药效评价^新

CD3-hEpCAM双抗体内药效评价^新
 

基因功能简介
 

CD3e( CD3e molecule)编码CD3-epsilon多肽，与 CD3-γ、-δ 和-ζ以及 T 细胞受体 α/β 或 γ/δ 异二聚体共同构成TCR-CD3复合物。此复合物是 T 细胞上常见的表面标记物，不仅作为形成 T 细胞受体 (TCR)-CD3 复合物的必需成分，而且作为外部信号转导因子具有重要功能，是调节T细胞功能的靶分子之一。CD3-epsilon多肽在 T 细胞发育中起重要作用，该基因的缺陷将导致免疫缺陷。
 

TCR-CD3 复合物及其信号通路^[1]

 基本信息
 

 基因编辑策略
 

B-hCD3E纯合小鼠人源CD3E蛋白表达分析
 

分离C57BL/6和B-hCD3E小鼠（n=3）脾细胞，流式检测hCD3E蛋白表达情况。
 

结果表明：野生型 C57BL/6 小鼠中可检测到mCD3蛋白表达，纯合B-hCD3E小鼠中只检测到hCD3蛋白表达。
 

 纯合小鼠T细胞激活功能流式分析
 

分离C57BL/6 和 B-hCD3E纯合小鼠 (n=4) 脾脏中的 T 细胞，与抗 CD3 抗体孵育 24h，流式检测 T 细胞增殖情况。
 

结果显示：抗 hCD3 抗体特异性活化 B-hCD3E纯合小鼠的T 细胞，且其活化水平与抗 mCD3 抗体处理的 C57BL/6小鼠相似，表明胞外区人源化改造对B-hCD3E纯合小鼠T细胞的活化无明显影响。
 

 CD3E单特异性抗体体内药效评价
 

C57BL/6(A) 和B-hCD3E纯合小鼠(B)接种MC38，待肿瘤体积约150±50mm³ 后分组（n=5），结果显示：两种小鼠模型中，mPD-1抗体均显著抑制肿瘤生长，表明：胞外区人源化改造对B-hCD3E纯合小鼠T细胞的胞内信号传递无明显影响。
 

同时，hCD3E抗体显著促进B-hCD3E小鼠肿瘤生长，而对C57BL/6小鼠肿瘤的生长基本无影响。进一步研究表明：给药（hCD3E抗体）后出现AICD效应，B-hCD3E小鼠T细胞被清除，进而促进肿瘤生长。
 

 CD3E单特异性抗体给药后T,B细胞清除流式分析
 

流式检测给药后小鼠血液中 B 细胞和 T 细胞的比率。给药后 48 小时，从外周血中分离淋巴细胞。抗 hCD3 抗体治疗组由于 CD3E 抗体治疗引起的活化诱导细胞死亡 (AICD) 效应，T 细胞比例明显下降。而抗 mPD-1 抗体组 T 细胞比例无明显变化。 
 

（A）与hIgG Ab相比，CD19⁺细胞各组间无显著性差异。（B）与hIgG Ab相比，h-CD3 Ab治疗后血液中TCR-β百分比显著降低。(C) 与 hlgG Ab 相比，血液中 hCD3 Ab 处理后CD4⁺百分比下降。(D) 与 hlgG Ab 相比，血液中 hCD3 Ab 处理后 CD8⁺百分比下降。
 

 Blinatumomab双抗体内药效评价
 

接种MC38-hCD19至B-hCD3E纯合小鼠皮下，肿瘤组织接近150±50mm³时进行分组（n=6），注射高、中、低不同剂量的Blinatumomab。
 

结果表明：高剂量的hCD3E双特异性抗体能够有效抑制肿瘤生长。证明B-hCD3E 小鼠模型是hCD3E 双特异性抗体体内疗效评价的有力工具。A.肿瘤体积±SEM。B.小鼠平均体重±SEM。
 

 CD3E 双抗体内药效评价
 

B-hCD3E 小鼠中 CD3E双抗 的抗肿瘤疗效评价。(A) CD3E 双抗可有效抑制 B-hCD3E 小鼠肿瘤生长。(B) 小鼠体重变化。如图 A 所示，不同剂量的 CD3E双抗可有效控制 B-hCD3E 小鼠的肿瘤生长，证明B-hCD3E 小鼠模型是hCD3E 双特异性抗体体内疗效评价的有力工具。
 

 CD3-hEpCAM双抗体内药效评价
 

接种MC38-hEpCAM至B-hCD3E纯合小鼠皮下，肿瘤组织接近150±50mm³时分组进行体内药效评价实验。
 

结果显示：与对照组相比，抗人 CD3/hEpCAM 双特异性抗体具有中度抗肿瘤活性。数据还表明，抗鼠 CD4（一种 CD4 消耗抗体）可增强抗人 CD3/hEpCAM双特异性抗体的抗肿瘤活性。

参考文献
 

[1] Ngoenkam, J., Schamel, W. W., & Pongcharoen, S. (2017). Selected signalling proteins recruited to the T-cell receptor-CD3 complex. Immunology, 153(1), 42–50. doi:10.1111/imm.12809.