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放射免疫分析的原理详述(二)

2021.5.13

非竞争性RIA,又称免疫放射分析(IRMA) 

 主要特点:标记的是抗体。 按反应原理分为两种: (一)单位点IRMA 其原理:抗原只有一个抗原决定簇,所测的抗原为小分子抗原,Ab+AgAg Ab+ Ab+ ImAd—Ag ImAd—AgAb+Ag Ab(去除)(负相关):(ImAd—Ag)固相抗原免疫吸附剂,一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗原;双位点IRMA:抗原有两个抗原决定簇,所使用的两种亚型抗体在与同一抗原分子结合时互不干扰ImAd—Ab+AgImAd—Ab—Ag+ AbImAd-Ab—Ag- Ab+ Ab(过剩的,游离的):(ImAd—Ab)固相抗体免疫吸附剂,一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗体。 (二)双位点IRMA,又称双抗体夹心法 从加样测定顺序上看,有三种方法:固相抗体先与未知抗原结合,再与标记抗体结合(正向两步法)。然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数;未知抗原先与标记抗体结合,再与同相抗体结合(反向两步法)。然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数;未知抗原与固相抗体和标记抗体同时反应(一步法,又称同时加样法)。然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数。 这三种方法都生成夹心状的抗体一抗原一抗体复合物,故又称双抗体夹心法。 糖类抗原CA50,CA125就用的是其中的第三种方法(一步法),血清中的未知抗原与固相抗体和标记抗体同时反应,生成夹心状的抗体一抗原一抗体复合物,然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数。

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