PCR产物电泳结果分析
基因组样品的模板量摸一个浓度吧,这个模板浓度不太合适。PCR产物以smear的形式出现,要么是样本降解,要么就是完全没有特异的扩增。
要通过PCR筛选基因敲除的小鼠,最基本的要求就是引物特异性好,扩增效率高。不然没法筛选的。如果这对引物之前筛选过,你可以换换模板,重新合成下引物就行,如果完全没有用于筛选,或者没能用基因组扩增过,就需要从引物着手考虑了。
这个条件看起来完全没有特异扩增,可以先尝试提高退火温度,或者是用touchdown PCR试试,如果还是不行,我就建议重新设计引物了。有可能的话,以基因组为模板设计引物,以避免其他区域的干扰。
推荐