高效液相HPLC溶剂的选择及使用（一）
高效液相色谱法又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。
流动相溶剂的正确选择对于高效液相色谱分析(HPLC)的成功与否非常重要。目前还没有一个较为理想的选择模式，主要依赖于经验的积累。由于高效液相灵敏度高，对流动相溶剂的纯度要求较高，不纯的溶剂会引起基线不稳或产生“伪峰”。
此外，溶剂的极性也要与待测样品、检测器匹配等等。如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响纯化分离，且会使柱子恶化。那么，我们在HPLC溶剂选择的时候，需要遵循哪些原则呢？
表1、常用溶剂在不同波长下的吸收值：
溶剂 波长 | 200nm | 205nm | 210nm | 215nm | 220nm | 230nm | 240nm | 250nm |
乙腈 | 0.05 | 0.03 | 0.02 | 0.01 | 0.01 | ＜0.01 | ＜0.01 | ＜0.01 |
甲醇 | 2.06 | 1.00 | 0.53 | 0.37 | 0.24 | 0.11 | 0.05 | 0.02 |
THF | 2.44 | 2.57 | 2.31 | 1.80 | 1.54 | 0.94 | 0.42 | 0.21 |
醋酸1% | 2.61 | 2.63 | 2.61 | 2.43 | 2.17 | 0.87 | 0.14 | 0.01 |
磷酸0.1% | ＜0.01 | ＜0.01 | ＜0.01 | ＜0.01 | ＜0.01 | ＜0.01 | ＜0.01 | ＜0.01 |
三氟乙酸 | 1.20 | 0.78 | 0.54 | 0.34 | 0.20 | 0.06 | ＜0.01 | ＜0.01 |
三乙胺1% | 2.33 | 2.42 | 2.50 | 2.45 | 2.37 | 1.96 | 0.50 | 0.12 |
1、流动相溶剂的选择：
流动相溶剂的正确选择对于高效液相色谱分析(HPLC)的成功与否非常重要。目前还没有一个较为理想的选择模式，主要依赖于经验的积累。
流动相溶剂选择的一般要求是： (1)溶剂应当是高纯度，溶剂与固定相不互溶，并能保持色谱柱的稳定性；(2)溶剂的性能与使用的检测器应当匹配；(3)溶剂对样品应有足够的溶解能力；(4)溶剂应具有低的粘度和适当低的沸点；(5)尽量避免使用具有显著毒性的溶剂。在选择流动相溶剂时，可以从影响分离度R 的因素即柱效、分离因子a和容量因子来考虑。选择溶剂时首先应排除一些物理性质(如沸点、粘度、紫外吸收等)不适于在液相色谱中使用的溶剂，然后选择能使分析样品中组分的容量因子值保持在1～1O之间、洗脱强度适当的溶剂。对含多组分的样品、值可扩展在0.5～20之间。在选出适用值的溶剂当中，还要进一步选择能将样品中的不同组分分离开、且能使每个相邻组分的分离因子a大于1.05的溶剂。所选择的适用Ic，和a的溶剂还必须与能提供高理论塔板数的色谱柱相组合。因此，作为一个色谱工作者，熟悉表征溶剂物理和化学特性的重要参数，如溶剂强度参数￡、溶解度参数δ、极性参数P、粘度η等，对液相色谱法流动相溶剂的选择会起到十分重要的作用。
能够作为液相色谱流动相使用的溶剂有100多种，但实用的溶剂只有少数几种。在实验室中有了甲醇、乙腈、水、四氢呋喃、正己烷、二氯甲烷，就能够解决9O％以上的色谱分离问题。
