告别黑白迎接色彩-荧光技术在WesternBlot显影上的应用-2
4.一致性和可重复性高
荧光信号是仅取决于目标抗原的量的静态值，而许多变量影响通过膜曝光获得的化学发光信号。一些变量（例如，酶底物反应）难以控制导致不一致和不可重复的结果。 Schutz-geschwender等（2004）报道了荧光蛋白印迹实验重复的标准偏差远远小于化学发光检测。因此，为了确保您的免疫印迹结果的重复性和准确性。
5.信号持续时间长
荧光信号非常稳定。您可以将您的印迹存储在冰箱中，并在您准备好后再进行成像。相比之下，如果您正在进行化学发光的免疫印迹，您通常需要马上开始成像。这是为了避免酶活性降低。
传统WB和荧光WB的综合比较：
| 化学发光法WB | 荧光WB | |
| 信号源 | 酶促反应的间接信号（HRP酶标二抗+ECL显色） | 荧光基团的直接信号（FITC/Dylight/Alexa Fluor荧光二抗） |
| 信号持续时间 | 几分钟到几小时 | 几天到几周，避光保存得当可长达一年 |
| 灵敏度 | 高灵敏度，底物种类多样（DAB、ECL等） 例如ECL显色，HRP酶标二抗1:20000~1:50000 |
灵敏度较好 例如Dylight荧光二抗 1:10000左右 |
| 一致性 | 印迹间可能存在差异 | 印迹间的重复性较高 |
| 检测 | 胶片、化学发光法成像仪器 常见凝胶成像仪器均可 |
需有合适光源和滤光片的成像仪器，例如li-Cor、Bio-rad、天能等。 |
| 定量 | 定性及半定量，单通道检测使标准化较为困难 | 带有内部对照的多重分析技术使标准化较易实现 |
| 其他注意事项 | 相似分子量需要进行剥离和印迹的重新检测 曝光时间可以较长 |
需要注意避免荧光背景 由于少量的激发光会穿过滤光片，因此曝光时间更长会导致背景荧光较高 需要注意避光 |
话不多说，结果才是硬道理：
骨灰级传统WB玩家跑出来的条带应该也就左上角的水平了吧？相较于采用荧光WB随手一跑的结果（右上图和下图），如果你是审稿人，你会pick谁了？
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