一种全缺失的腺病毒载体，缺乏所有腺病毒的编码序列，只含有约500 bp的腺病毒DNA复制和包装的顺式作用元件，需要辅助病毒为其反式提供腺病毒载体包装需要的所有蛋白，因此，又被称为辅助病毒依赖型腺病毒载体(helperdependentadenoviral vector, HDAd)。

辅助病毒可反式提供腺病毒载体包装和复制所必需的结构和功能蛋白，常是通过在第一代腺病毒载体包装信号两侧插入一种重组酶的酶切位点构建而成，同时会在E3 区插入一段“stuffer DNA”，以阻止潜在的E1+辅助病毒重组体正常包装。

腺病毒对肝脏具有天然亲嗜性，HDAd被广泛用于肝脏疾病的基因治疗，并获得较好的实验效果。HDAd 因具有感染非分裂细胞、转染多种组织的能力，以及安全等优点已被广泛用于神经系统疾病的基因治疗，亦获得较好的实验效果。HDAd 还被用于其他多种遗传性疾病的治疗，如：肥胖症、囊性纤维病、糖尿病和血友病等疾病的治疗。另外，在神经退行性疾病、肿瘤和心血管疾病均获得较好的实验效果。