是诊断菌血症和感染性心内膜炎的最重要方法。在近期末接受过抗生素治疗的患者血培养阳性率可高达95％以上，其中90％以上患者的阳性结果获自入院后第一日采取的标本。对于未经治疗的亚急性着，应第一日间隔1小时采血1次，共3次。如次日未见无细菌生长，重复采血3次后，开始抗生素治疗。已用过肯生素者，停药2－7天后采血。急性患者应在入院后3小时内，每隔1小时1次供取3个血标本开始治疗。本病的菌血症为持续性，无需在体温升高时采血。每次取静脉血10－20ml作需氧和厌氧培养，至少应培养3周，并周性作革兰染色涂片和次代培养。必要时培养基需补充特殊营养或采用特殊培养技术。血培养阴性率2.5％－64％。念珠菌（约1/2病例）、曲菌酶、组织胞浆菌、Q热柯克斯体、鹦鹉热衣原体等致病时，血培养阴性。2周内用过抗生素或采血、培养技术不当，常降低血培养的阳性率。