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叶绿体色素的提取、分离、性质和定量测定实验

2019.4.10
实验方法原理1. 溶解性:叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂,常用乙醇或丙酮提取。

2. 分离色素的方法有多种,如纸层析. 柱层析等。纸层析是其中较简单的一种。当溶剂不断地从层析滤纸上流过时由于混合色素中各种成分在两相中(即流动相和固定相)间有不同的分配系数,它们的移动速度不同,使样品中的各种成分得到分离。

3. 叶绿素受光激发,可发出红色荧光,反射光下可见红色荧光。

4. 皂化反应:叶绿素是二羧酸酯,与强碱反应,形成绿色的可溶性叶绿素盐,就可与有机溶剂中的类胡萝卜素分开。

5. 取代反应:在酸性和加温条件下,叶绿素卟啉环中的Mg2+可依次被H+和Cu2+取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。

6. 定量分析,叶绿素吸收红光和兰紫光,红光区可用于定量分析,其中645和663用于定量叶绿素a,b。
实验材料

小麦植物叶片

仪器、耗材

电子天平分光光度计层析缸

实验步骤

一、材料与设备:

1、实验材料:小麦、菠菜等植物的叶片

2、仪器:(1)电子天平 (2)分光光度计(3)层析缸

二、方法:

取鲜叶3g+100%丙酮10ml,磨成匀浆

色素分离方法:取一直径略大于培养皿的圆形滤纸,用吸管吸取样品滴于滤纸的中心处一滴,风干或烤干,在原位置重复七次。取另一宽约1cm的长条滤纸,搓成纸芯后从样品点中心穿过,使纸芯与圆形滤纸垂直。在培养皿内放一小铝盒,平放在培养皿上,盒内加适量汽油并加入1-2滴苯,把已处理好的滤纸芯下端浸入汽油中,迅速盖好培养皿盖,此时汽油借毛细管引力顺纸条扩散到圆形滤纸上,并把叶绿素沿着滤纸向四周推动,不久即可看到被分离的各种色素的同心圆环。

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