蛋白质含量的测定实验

实验方法原理

FOLIN 酚法所用的试剂有两部分组成。试剂甲可与蛋白质中的肽键起显色反应, 试剂乙在碱性条件下极不稳定, 易被酚类化合物还原成蓝色(蛋白质中的酚基将磷钼酸-磷钨酸还原成蓝色复合物)。在一定条件下, 蓝色强度与蛋白质的量成正比, 范围约在25～250 μg/ ml 蛋白质浓度。

实验材料 蛋白质

试剂、试剂盒 碳酸钠氢氧化钠硫酸铜酒石酸钠钨酸钠钼酸钠蒸馏水磷酸浓盐酸硫酸锂液体溴酚酞

仪器、耗材 722S 型分光光度计电子天平离心机容量瓶试管 吸管

实验步骤

1.  样品的制备

用台秤称取小白菜或其他植物10 g , 用剪刀剪碎后, 用碾钵碾成匀浆, 加水30 ml , 继续碾10 min , 倒入离心管中, 另加5 ml水将剩余物洗进离心管, 平衡后于1000 r/ min 离心15 min , 取上清10 ml 定容到100 ml , 待测。

2.  标准曲线的制作与样品测定

按下表操作，A . FOLIN 酚法    B . 考马斯亮蓝法

(标: 标准蛋白质溶液, F : FOLIN 试剂: K: 考马斯亮蓝 G250 试剂。自己制备的蛋白质溶液测定含量时注意稀释度)

注意事项

1.  蛋白质样品和呈色剂都不应有沉淀, 有沉淀应过滤除去。

2.  染料与蛋白质结合后, 形成的蓝色复合物易轻度沾附试管壁或比色皿, 每次使用不能用有着色的比色皿。使用完后应立即清洗干静。