微生物营养及环境条件实验（二）
3、温度对微生物生长的影响
⑴接种：取牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养基8支，用接种环按无菌操作法分别在斜面上划线接种大肠杆菌与枯草杆菌，勿划破培养基。
⑵培养：将已接种的斜面培养基，分别放在4℃、28℃、37℃和45℃四种温度下培养。
⑶观察：培养48h、72h后观察生长状况，根据菌苔的大小确定其生长*适温度。
4、氢离子浓度对微生物生长的影响
⑴培养基制备：分组按下列配方配制不同pH值的培养基，并用pH计校证pH值，然后分装入试管中，每管装量5～6 mL,0.1Mpa灭菌30min备用，见表。
⑵接种培养：取供试pH培养基三组用接种环按无菌操作法于试管中分别接入大肠杆菌、吸水链霉菌、黑曲霉。在37℃下培养48h。
⑶检查结果：出取培养物，观察并记录实验结果。
5、紫外线杀菌试验
⑴制平板：取无菌平皿6套，将已熔化并冷却至50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
不同pH值培养基配制表
试管 序号 | K2HPO4 0.2mol/L（mL） | 柠檬酸 0.1mol/L（mL） | NaOH 0.2mol/L（mL） | 硼酸 0.2mol/L（mL） | 牛肉膏蛋白胨 培养液（mL） | 总量 （mL） | pH值 （近似值） |
1 2 3 4 5 6 7 8 9 | 0.3 0.9 1.1 1.3 1.5 1.9 - - - | 1.7 1.1 0.9 0.7 0.5 0.1 - - - | - - - - - - 0.3 0.7 1.0 | - - - - - - 1.7 1.3 1.0 | 8 8 8 8 8 8 8 8 8 | 10 10 10 10 10 10 10 10 10 | 2.8 4.4 5.2 6.0 6.8 7.6 8.4 9.2 10.0 |
按无菌操作法倒入平皿中，使冷凝成平板。
⑵菌悬液制备：取试管无菌水2支，以无菌操作法分别取金黄色葡萄球菌和黏质沙雷氏菌各2环，接入无菌水中充分摇匀，制成菌悬液。
⑶接种：将已倒入培养基的平皿分成2组，每组3个，一组接金黄色葡萄球菌，一组接沙雷氏菌，用无菌吸管吸取已制好的菌悬液各0.1 mL，分别在接种于二组平板上，用无菌玻璃刮铲布均涂匀，随即用无菌镊子夹取无菌图案纸一张，小心放在接种好的平皿中央。
⑷分组：将接种的六个平皿分为三组，每组一个金黄色葡萄球菌，一个黏质沙雷氏菌。
⑸紫外线处理：将紫外灯先开灯预热2～3min。再将上述平皿置于紫外灯下，打开皿盖，在30cm距离处照射。一组照1min，1组照5min，1组照10min，小心地取下图案纸，盖上皿盖。用黑布或厚纸遮盖，送入培养室内。★此时能否不进行遮盖处理，直接拿出来培养？
⑹培养：将平皿于28～30℃温度下培养48h。
⑺观察：两菌在不同的处理条件下的生长状况，即有无生长、生长数量多少、生长的位置等。
6、化学药剂对微生物的作用
⑴制平板：取无菌平皿3套，将已熔化并冷却至50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作法倒入平皿中，使冷凝成平板。
⑵制备菌悬液：取无菌水3支，用接种环分别取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草杆菌各1～2环接入无菌水中，充分混匀，制成菌悬液。
⑶接种：用无菌吸管分别吸取已制好的菌悬液0.1mL接种于平板上，用无菌玻璃刮铲涂匀。注意做好标记。
⑷浸药：将灭菌滤纸片浸入供试药剂中。
⑸加药剂：用无菌镊子夹取浸药滤纸片，注意把药液沥干，分别平铺于同一含菌平
板上，注意药剂之间勿互相沾染并在平皿背面做好标记。
⑹培养：将平皿置于28℃下培养48～72h后观察结果。
