测定动物源食品中甲状腺抑制剂残留量实验—质谱法
实验材料 | |
---|---|
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 试剂和材料 衍生化试剂1:五氟苄基溴(PFBBr)(pentafluorobenzyi bromide,97%)。 衍生化试剂2: N-甲基-N-三甲基硅基-三氟乙酰胺(MSTFA)[N- methyl-N-(trimethylsilyl)-trifluoroacetamide,97%]。硅胶:40 ~ 63 um,10 nm (100A)。乙醇钠/乙醇:称取0.2 g NaOH溶于无水乙醇并定容至50 mL。固相萃取空柱(6 mL,10 mL)。内标物:双甲基硫氧嘧啶(DMTU)。 2. 前处理 方法1:(动物组织)用均质器将动物组织样品研磨成浆状,称取0.5 g于研钵中,加入1 ug/mL内标DMTU甲醇溶液50 uL并与2.0 g硅胶混匀,室温放置3 min左右后装柱,用淋洗液洗涤研钵并上柱。10 mL氯仿淋洗,6 mL含30%甲醇的氯仿(V/V)混合溶剂洗脱。吹干洗脱液,加入0.1 mol/L EtONa-EtOH溶液5000 uL、PFBBr25 uL,25 ℃水浴中衍生10 min。用HCl将PH值调至3.0(±0.3)3 x 1 mL二氯甲烷提取,合并提取液并吹干。6 mL硅胶小柱依次用5 mL乙酸乙酯、5 mL正己烷活化;1 mL 二氯甲烷溶解残留物后上样;5 mL氯仿淋洗,5 mL 二氯甲烷-乙酸乙酯(1 + 4)的混合溶剂洗脱。吹干洗脱液,加入50 uLMSTFA、50 uL二氯甲烷。密封后60 ℃水浴中衍生30 min。衍生完毕,用正己烷定容至10 mL,待 GC-MS分析。 方法2 (动物组织)准确称取2.0 g匀浆后的动物组织于50 mL离心试管中,加入1 ug/mL内标双甲基硫氧嘧啶甲醇溶液50 uL,3x 5 mL乙腈提取,合并提取液并吹干。600 uL水溶解残留物后倾入研钵中,并与2.0 g硅胶混匀,室温放置30 min左右后装柱。10 mL氯仿淋洗,6 mL含20%甲醇的氯仿混合溶剂洗脱。吹干洗脱液,加入 0.1 mol/L EtONa-EtOH溶液50 uL、PFBBr25 uL,25 ℃水浴中衍生10 min。用HCl将pH值调至3.0(±0.3),3 x1 mL二氯甲烷提取,合并提取液并吹干。加入50 uL MSTFA,5O uL二氯甲烷。密封后60 ℃水浴中衍生30 min。衍生完毕,用正己烷定容至1 mL,待GC-MS分析。 方法3 (牛奶和尿样)准确量取0.6 mL牛奶或尿样加入研钵中,加入1 ug/mL内标DMTU甲醇溶液50 uL并与2.0 g硅胶混匀,室温放置30 min左右后装柱,用淋洗液洗涤研钵并上柱。用含5%甲醇的氯仿溶液(V/V)淋洗柱子,20%甲醇氯仿(V/V)溶液洗脱,收集洗脱液。吹干洗脱液,加入0.1 mol/L EtONa-EtOH溶液50 uL、PFBBr25 uL,25 ℃水浴中衍生10 min。用 HCl将PH值调至3.0(±0.3),3 x1 mL二氯甲烷提取,合并提取液并吹干。加入50 uL MSTFA、50 uL二氯甲烷。密封后60 ℃水浴中衍生30 min。衍生完毕,用正己烷定容至1 mL,待GC-MS分析。 3. 仪器条件 (1)色谱条件 色谱柱:DB-5MS,30 m x 0.25 mmx0.25 um; 色谱柱程序升温:100 ℃恒温2 min,15 ℃/min升至260 ℃,10 ℃/min升至290 ℃,恒温5 min;
展开 |