抗体纯化：冷酒精沉淀法
1、 血清加3倍体积的蒸馏水，调节 pH至7.7(±)冷却到0℃。在激烈搅拌的条件下，加预冷的酒精（-20℃）到最终浓度为20%，保持在-5℃。产生的沉淀（a），含有大多数种类的免疫球蛋白。
2、 沉淀a悬浮于25倍体积的0.15～20mol/l NaCl溶液（冷）中，加有0.05mol/l醋酸调节 pH到5.1，产生的沉淀（b），包括大部分的IgA和IgM，IgG留在上清液内。
3、调节
上清液的pH到7.4，加冷酒精（-20℃～-30℃）到最终浓度为25%，维持在-5℃。所得到的沉淀（c）含有90%～98% IgG。不同动物，IgG分离的条件和产量略有不同。见下表。
4、从沉淀（b）可按下述方法进一步分离出IgA和IgM的混合物：将沉淀（b）悬浮在0℃
水中，调节 pH到5.1，离心去除不溶的蛋白。调节 上清液离子强度到0.01～0.0075,pH5.5。然后加冷酒精到最终浓度为10%，保持在
–2℃或-3℃低温，所得的沉淀（b-b）主要含IgA和IgM。
物 种 | pH | 沉淀条件 | IgG产量 | |
酒精浓度（%） | 离子强度 | |||
人 | 5.1 | 15. | 0.01 | 65 |
山羊 | 5.2 | 0 | 0.01 | 65 |
家兔 | 5.2 | 10 | 0.01 | 70 |
大鼠 | 5.0 | 15 | 0.01 | 50 |
豚鼠 | 5.1 | 15 | 0.01 | 70 |
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