丙酮酸激酶的测定实验
基本方案
实验方法原理 |
PK,ATP:丙酮酸磷酸转移酶。 有其他激酶的伴随,这个反应的直接实验: 例如,可以应用 P32 标记。由分光光度测定出,这个反应与 LDH 反应偶联,继续 NADH 的氧化反应: |
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实验材料 | 酶样品 |
试剂、试剂盒 | 三乙醇胺-HCl KOH KCl MgCl2 磷酸烯醇式丙酮酸 ADP NADH LDH |
仪器、耗材 | 分光光度计 |
实验步骤 |
实验所需「试剂」具体见「其他」 0.98 ml 实验混合物 0.02 ml 酶样品 25 ℃ 时,于 340 nm 处吸收值降低,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
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注意事项 | |
其他 |
试剂: 0.1 mol/L 三乙醇胺-HCl/KOH,pH 7.6(氯化三乙醇胺,Mr=185.7;18.6 g 溶于 800 ml H2O,用 1 mol/L KOH 调至 pH 7.6,再补充到 1000 ml) 0.5 mol/L KCl(Mr=74.6;373 mg 溶于 10 ml 水中) 0.25 mol/L MgCl2(六水合物,Mr=203.3;508 mg 溶于 10 ml 水中) 0.01 mol/L 磷酸烯醇式丙酮酸(PEP,三环己基铵盐,Mr=465.6;46.6 mg 溶于 10 ml 水中) 0.1 mol/L ADP(二钠盐,Mr=471.2;471 mg 溶于 10 ml 水中) 0.01 mol/L NADH(二钠盐,Mr=709.4;71 mg 溶于 10 ml 水中) LDH (商业产品有大约 500 U/mg,准备溶液时需 150 U/0.1 ml)
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