荧光原位杂交及其在人类基因组研究中的应用（一）

荧光标记的染色体原位杂交技术提供了一种快速而有效的手段，将DNA片断和特定的真核生物细胞的染色体区带联系了起来，并将这些DNA片断排序，这是研究 DNA顺序在染色体上位置的最直接的方法。最早，人们根据Gall和Pardue在1969年的工作，于70年代，建立起了同位素原位杂交技术，但当时只 是用于DNA顺序在多线染色体上的定位或是重复顺序在中期染色体上的定位。1981年，Gerhard和Harper等首先证明有可能将从个体基因中得到 的单拷贝顺序（SCP，single copy probe）通过同位素原位杂交技术定位到中期染色体上。在此基础上，80年代初起，荧光标记的原位杂交技术开始起步并得到运用且不断地发展。
 
1. FISH技术简介
 
FISH技术包括下列几个步骤：a.探针的准备和标记；b.探针和染色体的杂交；c.信号检测；d.杂交信号与分带染色体的比较

1.1    探针的准备

探针的标记有两种。直接标记是将荧光分子直接渗入到探针分子中，以前这种方法用的不多，由于有北京少的优点，近来在一些公司的试剂盒中得到应用。

常用的间接法是将一些类似于半抗原（hapten）的标记分子渗入探针分子中，用的较多的试剂有生物素，地高辛（digoxigenin），二硝基苯（dinitrophenyl，DNP），汞和磺酸盐（sulfonate）。

就掺入方式来说，生物素，地高辛等是以核苷酸衍生物的形式掺入的，可用切口平移法来进行的，现在更多的人开始用随机引物法，用这两种方法标记好的探针大小在 200-500bp范围内，是用于杂交的最佳大小。另外，也可以在已知顺序的两个引物之间用PCR法来扩增，或从合适的载体上通过RNA转录而来。

1.2探针和染色体的杂交

最佳杂交条件取决于探针和目标的性质。已标记好的变性的探针（200－500bp）与变性的染色体在含有甲酸胺，盐和硫酸葡萄聚糖的杂交缓冲液中杂交过夜接着是柔和的洗涤，以去除未杂交或错配对的探针。