玉米转基因——试纸条检测方法
1、目的
这个指南建立了检测玉米（没有经过加工的玉米产品）中是否存在 StarlinkTM 玉米并出具官方被提供结果的程序。在美国谷物标准法（USGSA）的授权下，这个服务作为官方标准。
2、背景
由 Aventis 作物科学公司开发的 StarlinkTM 玉米，是运用现代生物技术的方法，导入从细菌苏云金秆菌（Bt）来的遗传物质经过遗传改良而得到。结果， StarlinkTM 玉米产生了一个蛋白质 Cry9C，具有杀虫活性，能够有效控制欧洲钻心螟虫，美国环境保护局在1998年批准 StarlinkTM 玉米仅仅做动物饲料用。
由美国 SDI 公司提供的试剂盒 Trait V Bt9 Lateral Flow Test Kit，能在0.25％（400粒中有一粒 StarlinkTM 玉米）水平检测 StarlinkTM 中的 Cry9C 蛋白。
测试方案不能准确检测样品中 StarlinkTM 玉米的百分含量。检测的仅仅是根据样品的数目和大小，在一个指定的含量内，判断一个样品是否含有 Cry9C 蛋白。
其他 Cry9C 蛋白检验试剂盒，在被开发、评估和得到官方批准可使用之后其使用程序将会被公布。
3、检验可信度
基于取样理论，每一扦样批货物的大小对样品大小有重要的影响，这是谷物检验的一般原则，总的样品大小由可能接受的指定含量决定。分析方法的局限性决定了必须检验多少个小样。
官方扦样程序已经被发展为实用程序，用来获得随机样品。增加样品量能增加在低水平下检测的可信度；然而，大样品的可靠结果仅能通过检验多个小样而获得。
下表说明了用试剂盒 Trait V Bt9 Lateral Flow Test Kit 检验含有400粒的样品获得的。通过测试多个含有400粒的小样，该表提供了在5个置信水平上的信息，该表提供了在所有的试验样品出现阴性结果时，所期望的 StarlinkTM 最高百分含量水平。
试验样品出现阴性结果与 StarlinkTM 最高百分含量水平关系
编号
使用400粒的小样大小在5个不同可信水平的 StarlinkTM 百分含量
试验样品出现阴性结果与 StarlinkTM 最高百分含量水平关系
| 编号 | 使用400粒的小样大小在5个不同可信水平的 StarlinkTM 百分含量 | ||||
| 50 | 75 | 90 | 95 | 99 | |
| 1 | 0.17 | 0.35 | 0.58 | 0.75 | 1.2 |
| 2 | 0.087 | 0.18 | 0.29 | 0.38 | 0.58 |
| 3 | 0.058 | 0.12 | 0.20 | 0.25 | 0.39 |
| 4 | 0.045 | 0.085 | 0.15 | 0.19 | 0.29 |
| 5 | 0.035 | 0.070 | 0.12 | 0.15 | 0.25 |
| 6 | 0.029 | 0.058 | 0.10 | 0.13 | 0.20 |
| 7 | 0.025 | 0.050 | 0.085 | 0.11 | 0.18 |
| 8 | 0.022 | 0.044 | 0.075 | 0.10 | 0.15 |
分析一个小样，如果结果是 Cry9C 蛋白阴性，则一个扦样批中不含有超过1.2％的 StarlinkTM 玉米的可能性为99％，同样如果分析两个小样，两个结果都是 Cry9C 蛋白阴性，则一个扦样批中不含有超过0.58％的 StarlinkTM 玉米的可能性为99％。
4、样品准备
（1）警告 检验人员一定要额外小心，以免粗心混杂，确保样品的整体性。在官方样品中混入一粒外来样品就能影响试验结果。保证样品收集装置（例如取样铲子、收集斗）和实验设备（样品袋子、容器和分样器）没有残留谷物。
（2）样品大小 根据《谷物检验手册子》第一册《谷物取样》的程序取样。使用认可的分样器获取需要分析小样，保证原始样品大小能足够提供所有要求的小样的分析，用作测试样品，一般的刻度天平，可用作称量样品的缩分样。
分析的小样是115g（±5g）或大约400粒。这个大小要求适于所有的服务，包括呈送样品。如有必要，通过称100粒重然后乘以4来调节分析缩分样大小至大约400粒。
（3）测试的基础（分析缩分样大小）除非申请者另有指定，应把分析建立在样品作为一个整体之上（在去除破碎粒和杂质之前）。
5、测试程序
（1）加工样品
①取小样测试缩分样（大约400粒），用一般的刻度天平来称重。
②把小样放到一个干净干燥的用作捣碎的容器中（容器必须具有最小16液体盎司的容量）。
③将一个干净、干燥的刀片安装到混合装置上（食品加工器或混合器），在容器上放一个塑料保护罩，以防在样品加工时，容器破裂。
④以高速磨碎小样直到所有整粒被打碎（大约30s）。（注：也可用其他方法来磨碎小样，只要磨碎的颗粒的大小与混合器加工相一致，加工要以免交叉污染。）
⑤把小样从混合装置上卸下来，然后加入143～145mL 水。
在容器上放一个盖子反复摇动，湿润所有的玉米粉粒（大约10～20s），然后让成泥浆状的样品放置15～30s，小样应该浓稠但又含有自由流动的液体。
⑥使用检测试剂盒的提供的移液管将 0.5mL 液体从容器转移到 1.5mL 的样品管中。（注：一些玉米成分在这一步骤中被转移到样品管中。）
⑦加5滴 Trait V 样品缓冲液到样管中（小心：没有加5滴缓冲液到管中，可能引起假阳性结果。）
③盖上盖子，摇动大约10s。
⑨把1张 Trait V Bt99 测试条插入样品管中，让条带置于试管中直到控制线（顶线）清楚可见，如果样品是 Gry9C 蛋白阳性，测试线应在 10min 内形成。（注意：样品管中的液体不要浸没测试条带顶部的箭头。）
（2）Lateral Flow 测试条的结果分析在插入条带之后，要时常检查结果窗口，至少有一条控制线应该在储蓄垫下大约 1cm 处形成。在这个位置出现一条红线说明该测试条的功能正常。在控制线下出现的一条红线是测试线，这条红线表明测试结果是阳性。
6、设备清洗和废物处理
（1）清洗 混合容器和刀片必须用肥皂水清洗，再清水漂洗，在重新用前必须晾干。
（2）处理 将固体材料（如测试条，样品管，磨碎的玉米）扔到一个固体废物容器中进行常规处理。液体材料（过量的样品溶液）倒到下水道里。
7、仪器设备
（1）检测试剂盒材料 Trait V Bt9 Lateral Flow 测试条带， Traits 样品缓冲液，样品管（1.5mL），移液管。
（2）实验室设备 具有切割刀片垫片和混合/加工器的混合容器（至少453.6g），塑料保护罩，样品管架，有刻度的量筒。
8、贮藏条件
在室温下贮藏 Trait V Bt99 检测试剂盒（15.5～29.4℃）。把检测条保存在放有指示干燥剂的金箔小袋中，如果干燥剂不是蓝色，不要使用检测条或缓冲液。
