第十届全国生物医药色谱技术学术交流会大会报告(二)
浙江大学 方群教授
来自浙江大学的方群教授带来了题为《基于顺序操作液滴阵列技术的微流控分析和筛选》的报告。
方群教授首先讲到多相微流控技术是指利用多相微流体的物理化学特性和尺度效应，在微流控系统中进行微量微液滴（颗粒）反应器的生成、操控、反应、分析和筛 选。它的突出优势是超微量、高效、高通量、微型化，应用于高通量药物筛选，功能材料的高效可控合成，基于单分子和单细胞水平的分子生物学、细胞生物学和合 成生物学研究，临床检验，蛋白质组研究等多个领域。
在2010年方教授团队发展了自动化液滴分析筛选系统——液滴实验室（DropLab），它引入了液滴生成与试剂加入的新方法液滴组装，相对芯 片方法，新方法可灵活控制每个液滴的体积和化学组成，DropLab可应用于酶抑制分析，蛋白质晶体条件筛选，单细胞酶活性分析和单细胞DNA提取与净 化。
在前期发展的自动化液滴分析筛选系统——液滴实验室（DropLab）的基础上，建立了顺序操作液滴阵列（Sequential Operation Droplet Array, SODA）系统。SODA系统利用吸-点-移单元操作的组合可在PL精度水平自动化地完成灵活的液滴操控，有望成为一种通过化微量液体操纵、分析和筛选的平台，以及进行微量样品前处理的理想工具，它应用于单分子、单细胞分析，蛋白晶体筛选，组学分析，临床检验和组合化学等。
山东大学 陈建民教授
来自山东大学的陈建民教授带来了题为《在线小时分辨离子色谱技术在PM2.5研究中的应用》的报告。
陈建民教授首先报告了PM2.5的研究背景，近年来极端污染事件频繁发生，最大覆盖面积超过130万平方公里，部分地区能见度低于500米。影 响大气能见度（霾）类型：二次气溶胶（硫酸盐、硝酸盐、铵盐、有机物、粉尘）；生物质燃烧（富含钾及OC/EC）；沙尘（长程传输与混合机制）；烟花燃放 （富含钾及硫酸盐、硝酸盐）。面临的挑战是针对化学组成分析，通常使用滤膜采样分析，它失去了混合状态信息；针对新发展起来的在线技术可以辨别气溶胶颗粒 的化学组成，解析霾形成机制与能见度变化。
在线气体与气溶胶分析仪MARGA原理图
霾污染物中由二次转化而来的占很高比例，高浓度SO2和NO2及高SOR、NOR直接导致大气中大量的二次硫酸盐、硝酸盐气溶胶的形成。二次气 溶胶形成机制主要是氮氧化物、硫氧化物转化率，它呈现酸性，主要成分分析法是通过SPSS软件建模完成。PM2.5中化学组成浓度变化情况：霾及空气污染 呈现常态化；秸秆等生物质燃烧和沙尘影响能见度，助推大气污染加重；区域性灰霾形成后各省市相互影响。
最后陈教授介绍了MARGA联用技术，有：Marga+H-TDMA（吸湿性）；Marga+CRDs（光学特性）；Marga+A-ToF- MS（单颗粒化学组成）；Marga+TEM-EDX（单颗粒结构）；Marga+Fog（雾化学）。在这些方面均取得了很好发展，毫无疑问，MARGA 是一种在线高分辨离子色谱技术研究PM2.5的良好技术，该技术还有良好的改进和发展潜力。
赛默飞世尔科技（中国）有限公司 戴振宇先生
来自赛默飞世尔科技（中国）有限公司的戴振宇先生带来了题为《Thermo Scientific 色谱柱及相关产品在生物蛋白产品寡糖/唾液酸修饰分析中的新进展》的报告。
首先戴振宇先生讲了pH梯度离子交换色谱分离单抗唾液酸化异构体。戴先生介绍研究聚糖是为了研究治疗性蛋白，根据唾液酸化（电荷异构体）单抗分 离研究的一些背景情况，分析比较pH梯度和盐梯度，强阳离子交换色谱和强阴离子交换色谱，选择pH梯度-强阳离子交换柱的ProPac SCX-10最优。此外还有四个可以继续优化的地方：1. ProPac SCX-10与MAbPac SCX-10比较，可以获得更高分辨率；2.更窄pH梯度范围内的分离，可以获得更高分辨率；3. Thermo Scientific商业化的pH梯度流动相CX-1的应用，更加方便，重复性更好；4.应用小颗粒柱缩短分析时间，更快。
随后戴先生报告了Thermo Scientific最新的用于聚糖分析的液相色谱柱。Thermo Scientific 2013年1月推出的GlycanPac AXH-1，适合中性和带电聚糖；2014年1月推出的GlycanPac AXR-1，是带电聚糖的最好分离方法，具有超高分辨率；Accucore Amide HILIC，是理想的中性聚糖分离柱。
岛津企业管理(中国)有限公司分析仪器市场部 朱天强先生
来自岛津企业管理(中国)有限公司分析仪器市场部的朱天强先生带来了题为《在线蛋白质酶切技术》的报告。
朱先生表示蛋白质组学研究中酶解技术主要有离心柱、树脂+离心柱、磁珠和树脂等多种类型，但是酶切时间最短的离心柱类型还需要15分钟左右。
Dr Fred E. Regnier在2012年发表的文章中提到了Perfinity iDP的发明。Perfinity iDP能够加速Trypsin酶解和肽段脱盐（4min digests）；提高酶解的重复性，cv小于10%；降低成本。Perfinity系统采用3柱系统，包括自动酶解，脱盐和反相色谱。Perfinity iDP能够将样品前处理过程减少到20分钟，高通量达每天超过200个样品量。在重复性和交叉污染的实验中，对转铁蛋白6次酶解后反相色谱测定的数据表示平均CV=3.69%，42％的序列覆盖率，样品前处理时间为44分钟。在lgG实例中，特异性肽段的LC-MS/MS分析可用于单克隆抗体临床前研究。
朱先生还介绍到Nanotrap是核心壳带有多孔内部的水凝胶颗粒，包括各种亲和选择器诱饵和体积排阻的外部，这些颗粒在一个快速步骤中充当提供多维富集的分子刷进行简单地分离富集。最后，朱先生又提到了iMLayer基质沉积系统、iMScope质量显微镜和高分辨单细胞成像等技术。
