【求助】悬浮细胞换液和传代问题

最新回复

• pou (2015-11-14 20:32:09)

  
  “可细胞丢失不少怎么办”是什么意思，抱歉没看懂，请解释一下

• vtongli (2015-11-14 20:32:27)

  
  谢谢您。我的意思是换液后，细胞比没换之前要少。怎么办?

• jiushikeshui371 (2015-11-14 20:32:42)

  
  悬浮细胞传代，如果需要做实验大量扩增细胞的话，可以传代前先将培养瓶直立静置，待大部分细胞都沉降的细胞瓶底，勿晃动，轻轻吸出培养基，再加入新鲜培养基即可。这样细胞数目不会损失多少，而且上层吸去的也是死细胞。但建议加入新鲜培养基后分瓶扩增，毕竟一个较小的空间和有限的培养基环境下细胞扩增有限。
  如果暂时不要做实验，只是维持传代的话，只要将大部分培养基吸去，留一点儿在瓶底，再加入新鲜培养基即可。
  至于悬浮细胞何时传代合适，个人经验（我只养过THP-1和U937两种悬浮细胞）是待培养基变黄有些过，这时显示培养基已明显偏酸，对细胞并不适宜。一般待培养基开始变黄，这时将细胞瓶放平，细胞能密密麻麻铺满整个瓶底就要传代了，这表明细胞的生长空间要不够了，就需传代分瓶扩增。
  多多交流！

• ladyhuahua (2015-11-14 20:32:59)

  
  我觉得悬浮的很好养，细胞损失了会再长出来啦，换液后自然细胞要少些
  怕离心不好的话，1000rpm离个3~5min，没啥问题的

• nikonun (2015-11-14 20:33:42)

  
  一般长到85%~90%就该传代，不能等培养液变黄，一般1000rpm 4min即可。

• 土坷垃 (2015-11-14 20:34:03)

  
  普通培养瓶直立起来，静置半小时左右，务必在超净台中进行，不要晃动培养瓶，拧开瓶盖吸取1/2到1/3培养液，对细胞数量影响不大。
  培液变黄与传代没有密切的联系，培养液由红转黄的时候就可以换，当然我也有过培液很黄了才换，没有发现太大的细胞周期，增殖方面的差异。

• lagua123 (2015-11-14 20:34:21)

  
  培养瓶平放静置一会，轻轻拧开瓶盖，小心拿起，用弯头吸管吸取半液也可。吸管头应轻抵瓶壁，在液面部位缓慢吸取液体。细胞损失应该不大。

• remonte (2015-11-14 20:34:36)

  
  可以加入新的培养液，一瓶变两瓶啊

• fei1226com (2015-11-14 20:35:29)

  
  离心换液800r/min对细胞影响不大的，我的也是悬浮细胞，我发现离心换液比直接换液长的要好，因为细胞吹开以后，更有利于生长

• daod (2015-11-14 20:35:47)

  
  我养的NB4细胞，离心后再传（500g，5min）细胞状态更好长得更快；培基开始变黄，然后细胞在瓶底大约占到80左右就传，传的时候不能太稀释，否则长得很慢

• standbyme (2015-11-14 20:36:14)

  我养的NB4细胞，离心后再传（500g，5min）细胞状态更好长得更快；培基开始变黄，然后细胞在瓶底大约占到80左右就传，传的时候不能太稀释，否则长得很慢
  
  ====================================================
  
  你好，请问你是有NB4细胞吗？可不可以赠送一点？或是交换细胞？

• shenkunjie (2015-11-14 20:36:43)

  我养的NB4细胞，离心后再传（500g，5min）细胞状态更好长得更快；培基开始变黄，然后细胞在瓶底大约占到80左右就传，传的时候不能太稀释，否则长得很慢
  
  ===========================================================================================================
  
  你好，我也在养NB4细胞，细胞一开始的四五天状态都很好，抱团，细胞饱满，但是之后几天状态就不太好了，感觉细胞抱团像是死了似的，胞质不饱满了，一团一团，请问你知道这是怎么回事吗？是我传代不及时的原因吗，你都是什么时候传代？这四五天我就离了一次心，传了一代，平时都是黄了就加新液。给点建议吧，多谢。

• guagua (2015-11-14 20:36:58)

  
  如果想检测培养上清内的蛋白，换掉的话不是会损失了？求解