(1) 将单层细胞 (2X 106/ml, 6 ml)培养在直径 60 mm 的平皿上，生长液为含 10% 小牛血清、89%水解乳蛋白一酵母浸液培养液，加双抗并调 pH 至 7.2 。
(2) 培养物置于潮湿 5% CO2 培养箱中，于37℃培养成单层，除去生长液用 Hanks 液洗一次。
(3) 每皿加入各稀释度病毒液 0. 1 ml 或 0. 2 ml, 轻轻摇匀，使之均匀分布于整个细胞层， 37℃ 5% CO2 培养箱中吸附 90min 后，加营养琼脂覆盖。
(4) 将双倍浓度营养覆盖层溶液与等量的 1%(已融化)的琼脂水液混合，维持在 45-50℃,每皿加入 8ml 。双倍营养覆盖层溶液配制： 6 ml 灭活小牛血清、 20 ml 10倍浓 Eagle (MEM)，4 ml 3%谷氨酰胺(水配)、 5 ml 8. 8%NaHC03 (水配)、 2 ml 双抗、 63 ml 无菌三蒸水、加入等量 56℃ 巳融化的 2%琼脂的水溶液并摇匀。
(5) 冷凝后翻转平皿，37℃5% CO2 培养箱培养 4~5 d 后再加入 1 ml 营养覆盖层。
(6) 继续培养，在第 5-8 d(依病毒而定)，加入 0.01% 过滤中性红，检查空斑形成情况。 展开 | 
