转基因植株的表型分析及组织化学分析
实验概要
本实验将转基因拟南芥和水稻种子诱导发芽培养后进行了表型分析和GUS组织化学分析。
主要试剂
1. Tween-20(Sangon，上海)
2. MS培养基
3. 70%的酒精
4. 20%漂白剂
5. GUS反应缓冲液：
主要设备
1. LED光照培养箱(E-3 0 LED growth chamber，Percival，Boone，IA)
2. 高压灭菌锅
3. 便携式光谱仪(美国ASD公司)
4. MS培养基容器(Sigma，Magenta vessel GA-7 V8505)
5. 水浴锅
实验材料
纯合的转基因拟南芥菜的种子，去壳的水稻颖果
实验步骤
1. 拟南芥菜转基因植株的表型分析
1) 纯合的转基因拟南芥菜的种子用20%漂水(白猫，上海)加1滴Tween-20(Sangon，上海)灭菌20min。
2) 无菌水冲洗4-6次后种植于含有MS培养基的平板上。
3) 4℃春化3-5天后，白光下诱导发芽1天。
4) 放置于蓝光、红光和远红光的LED光照培养箱(E-3 0 LED growth chamber，Percival，Boone，IA)。
植物生长时所用的光源是E-30 LED生长培养箱，蓝光的波长λmax469 nm，红光的波长λmax680 nm，远红光的波长λmax730 nm，在连续光照条件下的温度是22℃。各种光质的强度均为30umol.s-1m-2，黑暗下的转基因植株用3层锡纸包裹，放于LED培养箱中。光谱测定用的仪器是美国ASD公司的便携式光谱仪，光强测定用的仪器是美国Li-Cor公司的Li250光量子测定仪。
2. 水稻转基因植株的表型分析
1) 去壳的水稻颖果先用70%的酒精火菌2min，然后再用20%漂白剂灭菌40min。
2) 无菌水冲洗4-6次后种植于含有0.8%琼脂粉和2%蔗糖的MS培养基上，并目放置于30℃培养箱中，黑暗下处理两天诱导发芽。
3) 将发芽的种子移植到新鲜的MS培养基容器中(Sigma，Magenta vessel GA-7 V8505)。容器的尺寸为77X77X97 mm。
3. GUS组织化学分析
取植物样品放入GUS反应缓冲液中，浸没，37℃保温过夜。吸出GUS反应缓冲液，加入70%乙醇脱色，每隔数小时更换一次。
附 件 (共1个附件,占50KB)
1.jpg
50KB
查看
