在微量滴定板中进行可溶性SCFv ElISA

[器材和试剂]

● 9E10单抗(SantaCruzBiotech)

●

● ／0．1％Tween 20(／Tween)

● 4％M

● 抗小鼠HRP标记抗体(例如Sigma目录号A2554)

● 含有抗体片段的上清

[方法]

1．按每孔100pl蛋白抗原包被微量滴定板，4℃过夜。中10ug／m1的浓度是包被抗原的标准浓度。但有时需要更高的浓度或者不同的包被缓冲液(比如碳酸盐缓冲液)。

2．弃去抗原液并用洗涤板孔2次。

3．加入200gl的2％M封闭每个板孔，37℃孵育2小时。

4．用洗涤板孔3次。

5．每孔加入50ul的4％M。

6．每孔加入50ul含可溶性抗体的培养基上清，用移液器反复吹吸混匀，室温孵育1小时。

7．弃去溶液，用／Tween洗涤板孔3次，再用洗涤3次。

8．每孔加入100ul 9E10单抗(用2％M按1：1000稀释)。室温孵育孔板l小时。

9．弃去溶液，用／Tween洗涤板孔3次，再用洗涤3次。

10．每孔加入抗小鼠HRP(用2％M按1：2000稀释)。室温孵育孔板1小时。

11．弃去二抗，并用／Tween和分别洗涤3次。

12．每孔加入100ul TMB系统溶液，并在暗处室温孵育10～30分钟。数分钟内，应呈现蓝色。

13．每孔加入50～100ul终止液，终止反应。

14．在450nm处读板。