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正常人羊膜细胞(HAM)原代细胞培养

2020.9.14

实验材料:
1.人胎盘;
2.A/GA:含抗生素的A(庆大霉素,50μg/ml;两性霉素B,1.25μg/ml;链霉素100μg/ml;青霉素100U/ml);
3.丙三醇;
4.含50%丙三醇的DMEM;
5.胰蛋白酶/EDTA;
6.Millicell微孔膜组织培养插片;
7.塑料刮片和无菌棉拭子;

实验方法:
1.用A/GA清洗组织;
2.分离人羊膜,用戴手套的手从胎盘上将羊膜钝性分离下来,分离出的羊膜薄层包括上皮细胞,基底膜和一些基质组织;
3.用无菌棉拭子除去基底膜下的基质组织,使分离的羊膜尽可能的薄;
4.在监测供者血清以除外疾病的时期,可以将粗分离出的人羊膜保存在含有50%丙三醇的DMEM中,-70℃存放;
5.临用前解冻人羊膜,用A清洗后将其切成直径约为2mm的小块;
6.用胰蛋白酶/EDTA消化组织块,37℃,30min;
7.用塑料刮片轻刮消化过的人羊膜,除去上皮细胞,注意不要破坏基底膜;
8.用A清洗裸露的羊膜,并将它的基底膜面(去除上皮细胞的面)黏附在Millicell微孔膜组织培养插片上。

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