自身免疫性溶血性贫血（autoimune hemolytic anemi, AIHA）为自身抗体引起红细胞破坏的一种溶血性贫血。AIHA患者在多次输血免疫刺激后, 可产生同种免疫性抗体, 此类抗体由于患者体内同时存在的自身抗体的掩盖作用而不易被发现。研究AIHA患者自身抗体的类型及其血型同种抗体的特异性, 对确保输血安全有重要的临床意义。我们采用抗人球蛋白试验和吸收放散试验, 对54例AIHA患者自身抗体的类型及同种抗体的特异性进行了鉴定, 选择不含相应抗原及交叉配血试验相合的血液进行输注, 避免了溶血性输血反应的发生。

　　1  材料和方法

　　1.1  材料  抗A、 抗B、 抗D、 抗C、 抗c、 抗E、 抗e、 广谱抗人球蛋白血清、 抗人IgG血清、 抗人C3血清、 抗体筛选细胞（Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ号）及抗体特异性鉴定谱细胞（1～10号）均购自上海市血液中心; 凝聚胺试剂盒购自台湾贝索公司; 微柱凝胶卡及其配套设备购自瑞士达亚美公司; 磷酸氯奎、 乙醚（分析纯）系西安化学试剂厂生产; ABO血型反定型试剂红细胞系3名献血员的血液洗涤后混合而成, 由第四军医大学唐都医院输血科制备。在第四军医大学唐都医院就诊的AIHA患者54例(男20例, 女34例, 年龄10～58岁), 均经抗人球蛋白试验及结合临床表现确诊。

　　1.2  方法

　　1.2.1  抗人球蛋白试验  抽取患者静脉血6 mL（ACD保存液抗凝）, 2 000 r/min离心10 min, 分离血清与红细胞, 红细胞用生理盐水洗涤3次, 配成30 mL/L的红细胞悬液备用。（1）直接抗人球蛋白试验（Direct antiglobulin test, DAT）: 取30 mL/L的红细胞悬液1滴加入试管中, 再加入抗人球蛋白血清1滴, 摇匀3 000 r/min离心15 s观察结果, 若为阳性, 再用抗IgG和抗C3抗体进行分型; （2）间接抗人球蛋白试验（Indirect antiglobulin test, IAT）: 取患者血清（或血浆）2滴加入试管中, 再加入30 mL/L O型RhD阳性红细胞悬液1滴, 摇匀放37℃水浴30  min, 用生理盐水洗涤3次, 加入抗人球蛋白血清1滴, 3 000 r/min离心15 s观察结果, 阴、 阳性对照参照文献［1］。

　　1.2.2  同种抗体检测  （1）氯奎放散试验: 将AIHA患者DAT为阳性的红细胞, 用生理盐水洗涤3次, 取压积红细胞0.2 mL, 加入200 mL/L氯奎生理盐水溶液0.8 mL, 在37℃水浴震摇5 min, 再用生理盐水洗涤3次, 取1滴配成50 mL/L 的悬液作DAT, 乙醚放散试验参照文献［2］。（2）自身温抗体吸收试验: 将IAT阳性患者的红细胞用37℃生理盐水洗涤3次, 取1 mL压积红细胞, 加10 mL/L菠萝酶1 mL, 混匀1 000 r/min离心洗涤3次, 将压积红细胞分成2等份, 1份压积红细胞加2 mL患者血清, 混合放37℃水浴30 min, 1 000 r/min 离心2 min, 将血清移到第2份压积红细胞中, 混匀放37℃水浴30 min, 1 000 r/min离心2 min, 吸出自身红细胞吸收后的血清, 用IAT进行同种抗体的检测与特异性鉴定。

　　1.2.3  ABO、 RhD血型鉴定与交叉配血试验  对血型鉴定困难及交叉配血试验不合的患者血液标本, 采用经吸收放散后的血清及红细胞进行血型鉴定与交叉配血试验。ABO血型鉴定采用盐水法进行正反定型; 疑难ABO、 Rh血型鉴定及交叉配血试验采用微柱凝胶法（microtubes gel technology, MGT）及手工凝聚胺法（manual polybrene test, MPT）进行检测［3］。

　　2  结果

　　2.1  抗人球蛋白试验  54例AIHA患者的DAT和IAT均显示阳性反应, 凝集强度DAT ～, IAT  ～。将患者红细胞检测结果（即DAT阳性）分为3组: (1)广谱抗人球蛋白组; (2)抗IgG组; (3)抗C3组。(1)、 (2)组抗人球蛋白试验阳性为IgG型; (1)、 (3)组阳性为C3型; (1)、 (2)、  (3)组均阳性为IgG+C3型（表1）。

　　2.2  ABO、 RhD血型鉴定及交叉配血试验  患者原血清及未洗涤红细胞, ABO血型鉴定正反定型不符、 交叉配血试验不合及抗体筛选阳性者54例, RhD定型均为阳性, Rh血型其他抗原误定者10例; 吸收后的血清及洗涤后的红细胞, ABO血型正反定型相符、 交叉配血试验相合及抗体筛查阴性者50例。同时将AIHA患者原血清及自身红细胞吸收后的血清进行自身抗体和同种抗体的检测, 结果所有原血清与抗体筛查细胞在盐水法、 IAT、 MPT及MGT法中均发生凝集反应; 而经患者自身红细胞吸收后的血清有50例与抗体筛查细胞不再发生凝集反应, 有4例患者血清仍与抗体筛查细胞发生凝集反应(表2)。

　　表1  54例AIHA患者抗体类型的分布（略）

　　表2  54例AIHA患者血清吸收前后与抗体筛查细胞反应结果（略）

　　*受检血清与谱细胞均呈非特异性凝集反应.

　　2.3  同种抗体的特异性鉴定  采用谱细胞对仍与抗体筛查细胞发生凝集反应的患者血清, 分别在4℃、 22℃及37℃用盐水法、 抗人球蛋白试验、 MPT及MGT法进行抗体特异性的鉴定。结果检出抗C抗体1例（与CCDee细胞凝集, 与ccDEE细胞不凝集）, 抗E抗体2例（与ccDEE细胞凝集, 与Ccdee细胞不凝集）, 抗e抗体1例（与ccEee及ccdee细胞凝集, 与CcDEE细胞不凝集）, 从而证实了患者血清中存在具有Rh血型特异性的同种抗体。根据患者Rh血型及自身抗体的血型特异性, 选择相容或交叉配血试验相合的洗涤红细胞悬液输注后, 检测结果显示患者血红蛋白上升, 未发生溶血性输血反应。

　　3  讨论
   
　　本研究在对75例疑似AIHA患者的检测中, 发现抗人球蛋白试验阳性者54例, 女性的阳性率(62.96%)高于男性（37.04%）。抗体类型以IgG＋C3型最多（62.96%）, 其次为IgG型（20.37%）及C3型（16.67%）。IgG＋C3型的临床症状、 溶血及贫血程度均较严重, 发生溶血危象者较多, 而IgG型、 C3型者贫血及临床症状较轻。AIHA患者因体内免疫系统功能的紊乱, 除产生自身抗体而引起溶血性贫血以外, 还可对输入血型不相合的红细胞产生同种免疫性抗体, 本组检出具有Rh特异性的同种抗体4例。因此, 对AIHA患者尤其是有妊娠史和输血史的患者, 在输血前进行同种抗体的检测具有非常重要的临床意义。由于AIHA患者存在自身抗体的干扰, 难以检测或排除血清中同种抗体的存在。目前检测同种抗体的最好方法, 是应用酶处理细胞或用患者自身红细胞对自身血清作抗体吸收, 排除自身抗体的干扰, 然后再用谱细胞对吸收后的血清进行抗体检测, 90％以上的AIHA病例可检出同种抗体［2］。
        
　　AIHA患者因血清中存在自身抗体, 而且部分患者还同时存在同种抗体, 因自身抗体能凝集患者及他人红细胞而导致ABO血型尤其是Rh血型鉴定困难［4］, 同时又能干扰对同种抗体的检测, 要为这些患者找到完全相配合的血液是相当困难的, 极易造成误输异型血而发生溶血性输血反应。因此AIHA患者能不输血者尽可能不输血, 采用激素与免疫抑制剂治疗, 大多数患者可获得良好的效果。对出现溶血危象而必须输血的患者, 如果无输血史或生育史, 选择输入交叉配血试验凝集强度最弱的供血者的洗涤红细胞悬液, 或根据自身抗体显示出的Rh等相关特异性, 输注缺乏相应抗原的血液是较为安全的。但AIHA患者如果有输血史或生育史, 则应在输血前进行同种抗体的检测并鉴定其特异性, 如发现有临床意义的同种抗体则必须选择与同种抗体相容的洗涤红细胞悬液进行输注, 才能确保输血治疗的安全和有效。

【参考文献】
  　　［1］ 杨世明, 张勇萍, 杜润家, 等. 微柱凝胶抗人球蛋白法检测IgG抗体的实验研究与应用［J］. 临床血液学杂志（输血与检验版）, 2007, 4（1）: 21-24.

　　［2］ 肖星甫. 输血技术手册［M］. 成都: 四川省科学技术出版社, 1992: 89-98.

　　［3］ 杨世明, 张勇萍, 潘晓莉. 冷凝集素综合征的血清学特性及检测方法探讨［J］. 细胞与分子免疫学杂志, 2006, 22（4）: 541-543.

　　［4］ 张鲁平, 李继明, 刘雯馨. 自身免疫性溶血性贫血引起血型及配血困难2例［J］. 临床血液学杂志（输血与检验版）, 2007, 4（2）: 95-96.