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高效液相色谱实验,如何确定及优化色谱条件

2021.12.29

这个问题很大,不是一句两句就能解决的,因为一个方法的开发与优化是个系统性的工作,应该不断的尝试与改进。
就一般情况来说,你想确定合适的液相分析方法,应该首先搞清楚你检测的物质中都含哪些物质,根据它们的分子式及结构物性,物理化学性质来选择合适的分析条件。比如是否怕水,有无紫外吸收,分子量大小,极性大小,酸碱性等因素。从这些情况来判断你液相检测的可能条件。
然后,基本以上情况你分别判断出流动相的PKA(酸碱性),确定了流动相的PH(不确定就选中性),波长,色谱柱,流速,柱温。一般情况下你可以选择,乙腈:水,C18柱,25度柱温,1ml/min流速,以乙腈:水=90:10运行一针,看出峰情况,主要看最后一个峰是几分钟出来,然后再调整流动相比例,优化成所有的峰都能冲洗出来,还能进行分离,同时进行波长扫描,确定合适波长,等等。
最后跟据内、外标或归一化调整流动相等达到省时,快速检测、准确等目的。

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