关于核小体的检测技术的介绍

　　许多不同的技术已被用于检测AnuA，除了LE细胞试验以外，还有染色质包被的串珠乳胶凝集试验，以及免疫沉淀（用天然组织蛋白重组酸萃取的组织部分和ELISA法都已被使用。早期的研究用“脱氧核苷蛋白”作抗原研制出一种孵育在1M生理盐水中的染色质中的预备品，但未得到明确鉴定。后期报道已有更好的方法来鉴定该预备品，并能分析凝胶电泳后的蛋白质和DNA的组成。染色质的类型分析以及阴、阳性判断对于辅助诊断SLE患者而获取高敏感性和特异性是非常重要的。第一种研究用于以变性的H2A和H2B作为抗原进行DNA再造，由血清结合上组织蛋白的变性区域，即天然染色质非暴露部分；第二种研究用于整条染色质作为抗原，剩余的Scl70蛋白引起抗Scl70，血清在此情况下产生弱阳性；第三种研究用于一个阴、阳性的弱的（低的）判断（硬皮患者血清呈现弱阳性）。第一代与第二代核小体检测技术的比较通过对SLE组（96例）、患者对照组（73例）、正常对照组（47例）进行AnuA和抗dsDNA抗体的检测，采用由德国EUROIMMUN公司生产的试剂盒和美国Coda公司生产的全自动酶标分析仪检测。结果表明，EUROIMMUN推出的第二代抗核小体抗体ELISA检测试剂与第一代比较敏感度差异不大，但特异性却有了明显提高。早期因核小体抗原纯化制备方法存在技术上的问题，纯化的核小体抗原常含有H1、Scl70(DNA拓扑异构酶I，一种DNA结合蛋白）、残留的染色质DNA和其他非组蛋白等蛋白成分，导致多种结缔组织病患者血清与核小体抗原交叉反应，尤其是在10%～68%的硬皮病患者中也可检测出AnuA，使得该抗体作为SLE特异性抗体的临床应用价值得到了很大的限制；而第二代AnuAELISA试剂在抗原的制备上有了很大的改进，抗原分离纯化技术提高，纯化的核小体抗原制品只含核小体单体，不含以上提到的DNA和组蛋白等杂质成分，可排除硬皮病患者血清假阳性反应，这样就使得AnuA对SLE的诊断价值得到了充分的发挥，极大提高了AnuA对SLE的特异性，已开始应用于临床常规检测。