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愈伤组织的种类划分

2022.11.21

愈伤组织的培养分为继代培养和分化培养。


继承培养

在外植体上形成以后,愈伤组织的继代培养在已充分发育,但没有出现老化现象之前,应及时从外植体上分离下来,转入继代培养基上进行继代培养。分离是必要的措施,继代培养时若连同外植体就会影响愈伤组织的产量和质量,可能是由于残存的外植体在死亡过程中会产生某些有毒物质,愈伤组织会出现老化、粘化及不正常分化等现象。一般情况下,从外植体上分离的愈伤组织须经过4-6周的培养才能得到充分的发育。为了增殖发育良好的愈伤组织,继代培养是有效的措施。在良好的培养条件下,甘蔗愈伤组织可继代一年以上而不丧失分化能力。

影响甘蔗愈伤组织继代培养的主要因素是激素。为协调继代培养中既要维持愈伤组织增殖生长良好、又要保持愈伤组织的分化能力的矛盾,就必须筛选最佳的激素浓度。有报道指出,2,4-D(2-3mg/L)对保持愈伤组织不分化是有效的,但随继代培养次数的增加,其分化绿苗的能力也随之下降。


分化培养

甘蔗愈伤组织在除去生长素或降低生长素浓度的培养基上,即能发生器官的再分化。在甘蔗的组织培养中,有些品种的愈伤组织对生长素有较强的吸收和分解能力,甚至在含有一定浓度生长素的诱导或继代培养基上亦能迅速分化成苗。影响甘蔗愈伤组织分化成苗的因素有愈伤组织的质量和大小、培养基、光照等。愈伤组织的大小对分化具有明显的影响,接种时愈伤组织块不宜小于5mm。

光照对甘蔗愈伤组织分化绿苗具有较好的促进作用,在无光照条件下分化出的是黄化苗,见光后又会返绿。一般在采光条件好的培养室,用自然散射光就可满足要求。在采光差条件的培养室则需加人工辅助光,通常用日光灯为辅助光源,光照强度1500-2000Lx,光照时间12小时。至于培养基对分化的影响,则认为适宜的生长素与细胞分裂素配比有利于甘蔗愈伤组织的绿苗分化。甘蔗不同品种、不同材料愈伤组织的分化所要求的最佳激素配比不同,常用的分化培养基是“MS+NAA(0.5-1.5mg/L)+BA(0.5-1.0mg/L)”,也有同时使用IBA(0.5-2.0mg/L)的。组织培养过程中的酚污染会影响培养效果。酚污染程度与外植体细胞的多酚氧化酶活性有关。甘蔗茎尖、嫩茎切段及靠近节处的幼嫩叶鞘均有较高的多酚氧化酶活性,所以这些组织的外植体接种后的酚污染也严重。培养基中添加的细胞分裂素物质有提高多酚氧化酶活性的作用,培养过程中的酚污染程度常随细胞分裂素浓度的提高而加重。在培养基中使用0.1-0.5%的活性碳,有减轻酚污染的作用,也有助于根的形成。



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