PVDF膜上蛋白的可逆染色
PVDF膜上蛋白的可逆染色可以用于:Western杂交时,确认蛋白是否转至PVDF膜上。
实验方法原理 | 丽春红带负电荷,可以与带正电荷的氨基酸残基结合,同时也可以与蛋白质的非极性区相结合,从而形成红色的条带。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | AmidoBlackisopropanolaceticacid考马斯亮蓝methanolPonceau S in TCAEtOHHACNa2S2O3AgO3Na2CO3MeOHAgNO3甲醛 |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 氨基黑染色 染液:0.5% Amido Black (w/v), 25% isopropa nol (v/v) and 10% acetic acid. 染色:将 PVDF 膜置于染液中染色数钟,ddH2O脱色。 2. 考马斯亮蓝染色 染液:0.1% Coomassie Brillia nt Blue R-250 (w/v) and 50% met hanol (v/v) 脱色液:40% met hanol (v/v) with 10% acetic acid (v/v) 染色:将 PVDF 膜置于染液中染色 15 min.,脱色液脱色。 3.丽春红染色 Ponceau S 染液:0.2% w/v Ponceau S in TCA (3% v/v) 染色:将 PVDF 膜置于染液中染色 5min 脱色:ddH2O脱色
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注意事项 | 丽春红染色液不适用于尼龙膜上蛋白的检测。 |
其他 | 丽春红的染色灵敏度不如考马斯亮蓝染色液。 |
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