高效液相色谱法测定保健食品中的昆虫草酸

高效液相色谱法测定保健食品中的昆虫草酸

1 范围

本方法为保健食品中虫草素酸（甘露醇）的高效液相色谱测定提供了一种方法。

该方法适用于保健食品中昆虫草酸(甘露醇)的测定。

2 原理

提取样品中虫草素酸，并在氨基柱上分离。采用蒸发光散射检测器进行检测。采用标准曲线法测定虫草素酸的保留时间和定量。

3 试剂和材料

除另有说明外，本方法所用试剂为分析纯净水水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 试剂

3.1.1 乙腈（C2H3N）：色谱纯。

3.1.2 无水乙醇（C2H5OH）。

3.2 试剂配制

提取物：40毫升水和60毫升无水乙醇（3.1.2）混合得到。

标准样品：昆虫草酸（D-甘露醇）对照品：纯度为99%。

标准溶液的制备：虫草素酸标准溶液（10.0mg／ml）：准确称量0.250克标准虫草素酸。加水溶解后，定容至25ml即可得到虫草酸标准溶液。

标准系列溶液制备：精密度吸收虫草酸标准溶液0.1ml,0.2mL,0.5ml,1.0ml、2.0mL,4.0mL,装于10 mL容量瓶中体积与水成比例，摇匀使用时准备。

4 仪器

4.1.高效液相色谱仪：带有蒸发光散射检测器(ELSD)。

4.2 超声波清洗器。

4.3离心机：转速（>4000r/min）。

4.4分析天平：灵敏度0.01mg，0.1mg

5 分析步骤

5.1 试样处理

5.1.1固体样品：取20片以上的片剂或胶囊进行粉碎、混合或半固体样品混合（软胶囊称量物），准确称量均匀样品0.5克（根据样品的含量，准确至0.001克），放入圆形底烧瓶中，加入25毫升提取物（3.2），混合，称重，水浴回流60分钟，取出，冷却后称重，化妆。失重，摇匀，通过0.45um微孔膜过滤，滤液待分析。

5.1.2液体样品：在25 mL容量瓶中准确吸收一定量的摇动样品10 ml(视样品含量而定)，加入无水乙醇(3.1.2)10 mL，混合，超声振荡30 min，取出，冷却，并将体积固定到刻度。混合后用0.45um滤膜过滤，用高效液相色谱法分析。

5.2 色谱参考条件

5.2.1色谱柱：氨基液相色谱柱，4。6、250mM、5、M或等同物。

5.2.2流动相：流动相A为水流动相B为乙腈水-乙腈=25≤75。

5.2.3 柱温：30℃。

5.2.4流速：1.0ml/min。

5.2.5注射量：10 mL。

5.2.6蒸发光散射检测器：气体流量：1.60slm，漂移管温度：60c

5.3 标准曲线制备

制备了一系列昆虫草酸标准溶液，并在给定的仪器条件下，采用高效液相色谱法进行了分析..以（C）的对数LogC为横坐标，相应色谱峰面积的对数LogA为纵坐标，绘制标准曲线。

6 测定

将10 UGL和样品溶液的标准溶液注入高效液相色谱（HPLC）中定性分析保留时间，并将样品的峰面积与标准系列进行比较。

7 结果计算

试样中虫草酸含量按式（1）计算:

..........................................（1）

式中:

十一-样品中虫草酸的含量为每100克或每100毫升克(g/100克或克/100毫升)；

用标准曲线测定每毫升（毫克/毫升）中的虫草酸浓度。

以毫升(ML)为单位测定的样品溶液的恒定体积；

m——样品重量，单位为克或毫升（克或毫升）；

100——单位转换;

1000——单位转换。

计算结果用重复条件下得到的两个独立结果的算术平均值表示并保留了两位数的有效数。

8 精密度

在重复条件下获得的两个独立测量值之间的绝对差值不超过算术平均值的10%。

9 其他

本方法检出限为0.1μg；

由于仪器的牌号和结构不同，蒸发光散射探测器的响应值(Y)与被测物体的浓度(X)之间可以呈指数关系，即y/axb，并可根据实际情况选择合适的关系曲线。