Western blot方法是生物实验室常用的蛋白检测方法之一，自从1979提出至今已有数十年的历史。用于分析蛋白的表达情况。通过抗原抗体的特异性结合来检测靶标蛋白，常用的检测方法有化学发光法和荧光方法。荧光检测方法由于可以进行多重检测且信号稳定，越来越受到大家的青睐。二抗直接标记荧光基团，荧光信号强度和目标蛋白浓度成比例关系，而不依赖于酶促反应，定量更准确。NIR近红外荧光检测方法，印迹膜自发荧光较低，信噪比高。NIR荧光检测能获得高信噪比和高质量图片主要依赖于激发强度大，精密的激光光源和专业的光学元件。

　　激光光源相比于LED、氙灯/卤素灯更容易达到染料的吸收峰

　　在成像系统中,光源的选择基于其激发特定染料的能力，选择光源的标准是找到一个可以传递必要能量的可用激发光（实际激发荧光探针的光），同时又可最小化错误波长光浪费的标准。激光光源近红外成像的最大优势在于更接近普通染料的激发峰。

　　例如染料 IR Dye® 700 和Alexa Fluor® 680 在685nm处有个最大吸收峰(图1A, 1B,和 表1).Azure Biosystems cSeries成像系统带有660nm激光光源，而使用LED或者白光（氙灯和卤素灯）的激发光源在630nm左右，染料激发不完全。

　　染料IR800和Alexa Flour在780nm有个最大吸收峰（图1C,D和表1）。Azure Biosystems cSeries带有785m的激光光源。而使用LED或者白光（氙灯和卤素灯）的激发光在最大吸收峰偏左的方向，染料激发不完全。

　　窄光谱激光减少光泄露的产生

　　激光器在所选染料的激发峰内提供强大的、精确的激发。窄光谱激发相比于弱的、非特异性的LED和氙灯/卤素灯白光光源系统可以消除光泄露和人为背景的产生（图2）。减少图像噪音，提高信噪比。

　　激光检测在更短的时间内实现更高的灵敏度

　　激光光源更接NIR染料的最大吸收峰，并且提供更少的光泄露。那么是如何影响成像的呢？使用羊抗兔的 IR 700标记的抗体孵育进行梯度上样的印迹膜。印迹膜首先使用LED成像系统曝光30s，然后使用激光成像系统曝光10s（图3A）。即使成像时间少3倍，在印迹膜上也可以看见同样数量的条带。激光光源更接近染料的吸收峰，帮助用户节省成像时间。

　　激光检测具有较低的背景

　　评判数据的好坏信噪比是其中一部分，而并不是完全由信号强度决定。节省时间是其中一个好处，第二个好处是，较短的曝光时间有助于减少背景荧光。信噪比是通过分析每个明亮条带的信号强度分别除以所选区域的背景强度所得到（图3）。短的成像时间可以减少背景，提高信噪比同时具有较好的灵敏度。

　　总结

　　激光光源更接近NIR染料的最大吸收峰，激发强度大具有较少的光泄漏。成像时间短，自发荧光低，信噪比高等特点。

　　AzureC600成像系统是市场上唯一即可做激光近红外、又可以做化学发光、多色荧光western blotting分析的成像系统，满足实验室的各种成像需求。

　　AzureC150和C200为基础机型，从C200可升级至c300、c400、c500和c600机型。因此，无需要更换仪器实现UV、可见光、化学发光、多色荧光和近红外成像的功能。

　　参考文献

　　1.Towbin, H., Staehelin, T., & Gordon, J. (1979). Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. PNAS, 76(9), 4350–4354.

　　2. http://www.coherent.co.jp/document/whitepaper/bio/Lasers_vs_ LEDs_LaserAdvantage_no2_Spectral_Brightness.pdf