脂肪酶的测定实验
pH 稳定计(自动滴定器)法
荧光分析法
实验方法原理 | |
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实验材料 | 酶样品 |
试剂、试剂盒 | 氯化钠 氯化钙 牛血清蛋白 牛磺胆酸钠 橄榄油-阿拉伯树胶乳胶 脂肪酶 NaOH |
仪器、耗材 | 自动滴定器 |
实验步骤 |
实验混合物: 5 ml 橄榄油-阿拉伯树胶乳胶 5 ml H2O 2 m l 3.0 mol/L NaCl 1 ml 0.075 mol/L 氯化钙 2 ml 0.5%BSA(酵母脂肪酶)或 0.027 mol/L 牛磺胆酸钠(猪脂肪酶) 15 ml,调至 pH 8.0 空白对照:记录约 3 min 内,每次自动滴定器加入的滴定标准液的量。 样品:在实验混合物中加入合适量的稀释酶(根据活性),并记录约 5 min 内,每次自动滴定器加入的滴定标准液的量。 计算: 25℃、pH 8.0 时,从乳化的橄榄油中,每分钟一个单位释放出 1 umol 脂肪酸。
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注意事项 | |
其他 |
试剂: 3.0 mol/L 氯化钠(NaCl,Mr=58.4;17.5 g 溶于 100 ml 水中) 0.075 mol/L 氯化钙(CaCl2·6H2O;Mr=219.1;1.62 g 溶于 100 ml 水中) 0.005 mol/L 氯化钙(稀释 0.075 mol/L 氯化钙溶液 15 倍)。 0.5% 牛血清蛋白(BSA,酵母脂肪酶) 0.027 mol/L 牛磺胆酸钠(猪脂肪酶,Mr=537.7;1.45 g 溶于 100 ml 水中) 橄榄油-阿拉伯树胶乳胶。溶解 16.5 g 阿拉伯树胶于 130 ml 水中,补充至 165 ml。加入 20 ml 橄榄油和 15 g 碎冰,低速搅拌直到乳浊液形成。用玻璃绒过滤。 脂肪酶(储存溶液:每毫升 5 mmol/L 氯化钙溶解 1 mg,实验中再稀释于 5 mmol/L 氯化钙中) 0.01 mol/L NaOH 标准溶液作为滴定剂,加入自动滴定器的滴管中。
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