1. 置换剂

(1) 置换剂的选择　置换剂的选择是置换色谱能否成功地分离和纯化目标产物的关键因素之一。

理想的置换剂必须符合以下条件:

●与样品中其它组分相比, 对固定相的吸附力最强, 而且呈现L angm u ir 吸附行为;

●化学稳定性好, 不与样品中任何组分发生反应;

●易溶于流动相, 且能快速完成色谱柱的再生;

●易得到高纯度的产品, 因为置换剂中的杂质可能污染样品且增加色谱柱再生的难度;

●若分离后的产物混有置换剂, 置换剂应较易除去;

●无毒, 以符合药用及食用生物产品的法规要求

2. 固定相

理想的固定相应具备以下条件:

●样品及置换剂在固定相上应有较强的吸附作用, 且吸附是可逆的;

●样品及置换剂在固定相上的吸附等温线应为L angm u ir 型;

●样品各组分在固定相上的吸附能力应有较大差别, 以保证置换色谱带的交叠部分尽可能小而获得良好的产率;

●有较好的化学稳定性, 可适用于不同pH 值的缓冲液和有机溶剂;

●有较大的比表面及吸附容量;

●有较好的机械强度, 而且容易再生。

3. 流动相

作为置换色谱的流动相与所采用的固定相有很大的关系。流动相对样品应有足够大的溶解度, 以免样品溶液在分离过程中被逐渐浓缩, 超过饱和溶解度而发生沉淀。另外, 所选择的流动相应有较好的化学稳定性、低粘度、低毒性且较易和样品分离。传统上, 人们都是参考前人的工作及反复试验来选择合适的流动相, H uang[ 55 ] 等人则提出了用溶度参数的方法预测样品在溶剂中的溶解度及分子间的相互作用力和亲合力, 以筛选合适的流动相。Ho rvath等在流动相中加入添加剂或改性剂, 可以改变样品组分的保留行为, 提高多组分置换色谱的分离效果。在一定的条件下, 将有机改性剂加在流动相中对产量的影响与增加置换剂浓度有相似的结果。此外,

在离子交换置换色谱中, 流动相中盐的浓度对置换剂的置换效率和样品分离度都有影响 , 其中,流动相中盐的浓度对高分子量置换剂影响不大, 而低分子量置换剂宜选用高盐浓度的流动相。

4. 非Langm u ir 型等温线对置换行为的影响

置换色谱要求吸附等温线应是L angmuir 型,但是许多生物分子对吸附剂的吸附作用是不相同的, 有些并不呈现L angm u ir 型, 而且不同物质在同一吸附剂上的吸附等温线有时是交叉的, 这时置换色谱的分离情况就显得较为复杂, 有时甚至根本无法分离。