怎么选择流式抗体?

2018年7月13日 13:11:04 来源: 互联网
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我们开始流式实验时,首先要选择抗体,必然要涉及到荧光的选择,尽量使这些荧光的补偿值降到zui低。

 

1,我们需要了解我们用的流式细胞仪的硬件设施(激光,滤光片)

 

 2,选择合适的荧光染料,尽量利用到你的仪器上的所有激光,这样可以使这些荧光交叉可能性达到zui小。一般四种颜色或以下的比较好选,常用:FITC,PE,APC,Percp-cy5.5。界面有点不同,但基本原理就是设置好你需要集中颜色,用的是哪台仪器,几根激光。。。软件就会自动列出合适的染料。

 

3,选择好荧光染料以后,就是将这些染料与你的抗体联系起来,这就要根据自己实验的需要了,有些常用的抗体上可能标记有很多种染料,但有些不常用的选择性就不太多,所以可以先定一些无法选择的抗体,然后就是根据表达量少的标记荧光信号强的染料,认为重要的抗体标记荧光信号强的,常用荧光的强弱如下:PE>APC>PE-CY7>Percy-cy5.5>FITC>APC-CY7。

 

4,抗体确定好后,就可以开始预实验了:包括样品的处理,抗体的浓度,时间,这些都需要一定的try。

 

5,正式开始实验需要做blank/isotype,单染(两两调补偿),复染(sample)。


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