色谱柱的平衡和再生技巧
反向色谱柱在经过出厂测试后是保存在甲醇(或乙腈)/水中的。请一定确保您所使用的活动相和甲醇(或乙腈)/水互溶,由于色谱柱在运输过程中可能会干掉,因此在用活动相分析样品之前,应使用分10-20倍的体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱。
假如您所使用的活动相中含有缓冲盐,应留意用含水量很高(约95%)的活动相过渡,样品分析完后,冲洗柱子是亦然。过往传统的方法使用纯水冲洗,对于非极性柱,如C8或C18,由于纯水不能浸润填料表面而冲倒碳链,造成柱效下降。
另外,分析样品时,由于纯水在填料表面不能浸润形成水膜,出现样品不保存而分不开,重现性差,所以对于一般的C18或C8,有机溶剂不能低于5%。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。假如该色谱柱需要使用含水或甲醇或乙腈的活动相,请在使用活动相之前用乙醇或异丙醇平衡。
色谱柱在平衡过程中,将流速缓慢地进步用活动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂浓度假如较低,则需要较长的时间平衡)。
色谱柱的再生:
建议用来冲洗的溶剂体积
色谱柱规格 柱体积 溶剂体积
150×4.6 2.50ml 50ml
250×4.6 5.0ml 100ml
250×10 20ml 400ml
请根据下表选择您的再生方法:
极性固定相(如Si,NH2,Diol色谱填料)的再生:正庚烷-氯仿-乙酸乙酯-丙酮-乙醇-水
非极性固定相(如反向填料C18,C8等)的再生:水-乙腈-氯仿(或异丙醇)-乙腈-水