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用肽底物检测蛋白质激酶的活性和特异性实验

2019.9.17

利用肽底物分析酪蛋白激酶Ⅰ和Ⅱ
利用肽底物分析CaMKⅠ和Ⅱ

试剂、试剂盒	酪氨酸激酶分析缓冲液酪蛋白激酶肽底物溶液
实验步骤	1. 在离心管里配制 50 μl 反应混合物： 5X 酪氨酸激酶分析缓冲液 10 μl 10 mmol/L 酪蛋白激酶肽底物溶液 5 μl [γ-³²P] ATP（终浓度 5 μCi/5 μmol/L ATP) 5 μl 水（取决于下一步所加的激酶样品的量） 0~30 μl 5X 酪氨酸激酶Ⅰ和Ⅱ分析缓沖液 100 mmol/L Tris-HCI，30℃ 时（pH 7.5) 25 mmol/L MgCl₂ 2.5 mmol/L DTT 750 mmol/L KCl 2. 加入 1~30 μl 激酶样品开始反应，继续于 30℃ 孵育一定时间。 3. 停止反应，依照利用 β-酪蛋白作底物的分析反应产物。展开

试剂、试剂盒

酪氨酸激酶分析缓冲液酪蛋白激酶肽底物溶液

实验步骤

1. 在离心管里配制 50 μl 反应混合物：

5X 酪氨酸激酶分析缓冲液                           10 μl

10 mmol/L 酪蛋白激酶肽底物溶液                5 μl

[γ-³²P] ATP（终浓度 5 μCi/5 μmol/L ATP)     5 μl

水（取决于下一步所加的激酶样品的量）      0~30 μl

5X 酪氨酸激酶Ⅰ和Ⅱ分析缓沖液

100 mmol/L Tris-HCI，30℃ 时（pH 7.5)

25 mmol/L MgCl₂

2.5 mmol/L DTT

750 mmol/L KCl

2. 加入 1~30 μl 激酶样品开始反应，继续于 30℃ 孵育一定时间。

3. 停止反应，依照利用 β-酪蛋白作底物的分析反应产物。

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活性检测特异性蛋白质激酶肽底物

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用肽底物检测蛋白质激酶的活性和特异性实验

周锦帆