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高效液相色谱仪定量分析法有几种?

2020.1.09

定量色谱分析是根据成分检测响应信号的大小,定量测定样品中各成分的相对含量,这是基于每种成分的量(重量或体积)与色谱检测器产生的检测响应值(峰高或峰面积)成比例的事实。具体到具体方法,主要有以下几种方法:

1.标准化方法

当样品中的所有成分都可以流出高效液相色谱仪的色谱柱并在检测器上产生相应的信号(色谱峰)时,通常使用归一化。

CI=MI/M,100%=FIAI/ or FIAI (100 per cent)

*优点:简单方便,不受注射量和操作条件波动的影响

*缺点:所有组件必须达到峰值,每个组件必须有一个校正系数

2.外部标准法(也称为标准曲线法)

制备已知浓度的标准样品进行高效液相色谱仪的色谱分析,测量各组分的峰面积或峰高,绘制峰面积(或峰高)和浓度的标准曲线,然后在相同的操作条件下,输入相同量(总体积)的未知样品。ns作为分析的标准样品,测量被分析成分的峰面积(或峰)。在标准曲线上发现了相应的浓度。

该方法主要用于工厂的日常控制分析,分析结果的准确性主要取决于注射量的重复性和操作条件的稳定性。

CI=MI/m × 100%=fiai/m × 100%

*校准:标准曲线、两点法和单点法

*优点:简单方便,不需要所有成分达到峰值(校正系数),常用于几个成分的分析

*缺点:操作条件的波动影响很大,注射量影响很大。

3.内部标准法

由于吸附或化学反应等原因,高效液相色谱仪色谱柱不能让所有组分流出,或者所有组分都可以流出,但是检测器不能给所有组分提供相应的色谱峰,或者有些样品太大(不能获得完整的峰),或者太小,或者只需要对复杂样品中的几个组分进行定量分析,可以采用内标法。

过程:如果在总质量为m的样品中加入质量为mS的内标物质s,则根据被测物质和内标物质的重量以及高效液相色谱仪的色谱图上相应的峰面积比,得到某一组分ⅰ的含量。

mi/ms = fiAi / fsAs

Ci = mi/m ×100%

= fiAi ms / fsAs m×100%

*优点:所有部件不需要达到峰值(校正系数),操作条件和注射量基本不受影响。

*缺点:很难找到内部标准-稳定且无反应、结构性能、相似性、保留时间插值和完全分离。

*注:内标法更适合低含量成分的分析。通常,被选为内标的物质优选不存在于样品中,其保留值在所有组分的保留值中间。添加的内部标准的内容和待测试组件的内容不应有很大差异。

4.叠加法(内部加法)

内部添加适用于更特殊的情况:当地图上没有合适的位置插入内部标准峰,或者由于各种条件没有合适的内部标准时。

此时,可以先从样品中绘制一张图谱,然后在注射前将一定量的被测组分添加到样品中,以查看峰面积增加了多少,并且可以根据该比值计算原始含量。


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