食品中微生物限度检验方法验证初探
摘要：运用微生物限度检查方法对饮料进行微生物限度验证，通过实验分析得出有一个品种对金黄色葡萄球菌具有明显的抑菌作用，回收率不足百分之七十，证明GB4789.1～GB4789.31-2010微生物限度检查存在局限。
从卫生的角度对食品质量进行评价，是眼下比较重要的一种的测评方法，是人们饮食安全的保证，本文挑选了3批饮料作为微生物限度检查方法的验证对象。
1 实验所要使用的仪器、菌种和样品
1.1 仪器
灭菌器（LMQC12360J）、洁净工作台（SCW—CJ—2FD）、电热鼓风干燥箱（101-2）、生物安全柜（BHC-1300ⅡA2）。
1.2 菌种
菌种都来自黑龙江省食品药品检验所取得的，均为第3代。
1.3 样品
柠檬口味运动饮料，20110506，广州省百事有限公司样品；西柚汁，20110618，农夫山泉股份有限公司样品；仙怡果园酸角饮品，20110904，保山市仙怡饮料厂样品。
2 对细菌、霉菌及酵母菌计数方法通过实验进行验证
2.1 制作所需菌液
（1）把挑选的三种样品的菌种放置于营养肉汤中进行细菌培养，在35℃的温度中，培养18～24h之后，分别取三种样品的培养肉汤1ml+9ml，把它们进行稀释，浓度稀释到10-5～10-7，让它们保持在50～100cfu/ml，为以后做活菌数检查做准备。
（2）把白色念珠菌菌种放置于改良马丁培养液中进行培养，在25℃的温度中，培养18～24h，然后取出1ml+9ml培养液体，把它们进行稀释，稀释到10-5～10-7，让它们的浓度保持在50～100cfu/ml，为以后做活菌数检查做准备。
（3）把上文中提到的三种菌种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌种10-5～10-7的稀释液，取出各1ml，然后采用营养琼脂培养的培养基20ml注射到器皿中，对两个器皿进行平行检测，30℃～35℃的温度下，恒温培养48h，进行细菌计数，挑选大概 50～100cfu/ml左右的稀释液，当做试验菌液组菌液。
（4）量取白色念珠菌菌种的稀释液体10-5～10-7，分别1ml，然后选用玫瑰红钠琼脂培养的培养基20ml，注射到器皿中，对两个器皿进行平行检测，30℃～35℃的温度下，恒温培养48h，进行细菌计数，挑选大概50～100cfu/ml左右的稀释液，当做试验菌液组菌液。
2.2 制作所需的供试液
挑选各物质的原液进行常规方法的检测，把各种物质的原液10ml加入0.1%蛋白胨氯化钠90ml进行稀释，稀释之后的稀释液作为稀释法检验的供试液。
2.3 验证试验
2.3.1 菌种液体组 检测每一组加入的试验菌数目。
2.3.2 试验组 常规法：量取1ml的供试液，以及50～100cfu供试验用的试验菌，然后把它们注射到两个器皿中，马上分别倒入琼脂培养的培养基。要求每一个菌株分别制作2个平皿，按照平皿法分别测评它们含有的菌种数。
培养基稀释法：分别量取0.5ml、0.2ml、0.1ml按照1：10的比例稀释过的供试液和50～100cfu供试验用的试验菌，然后把它们分别注射到器皿中，马上分别倒入琼脂培养的培养基。要求每一个菌株分别制作2个平皿，按照平皿法分别测评它们含有的菌种数。
2.3.3 供试品对照组 量取供试样品原液1ml ，把它注射到2平皿，按照菌落计数法，检测供试样品中本底菌数。
2.3.4 回收率计算 把相关的数据带入到公式中，对试验组的菌种回收率进行计算。
试验组的菌种回收率=[（试验组平均菌落数—供试品平均菌落数）/菌液组平均菌落数]×70%。
2.3.5 结果 通过常规法试验，分别进行3次平行，进行结果比对。菌种在30℃～35℃的温度下，培养3天，挑选的白色念珠菌在23℃～28℃的温度下，培养5d。按照平皿法进行菌落数的计算，同时对菌数回收率进行公式运算，结果见表1。
经过常规试验法证明，在0.2ml/皿供试液时，能够消除这种样品菌种对金黄色葡萄球菌菌种生长的抑制作用。结论见表2。
GB4789.1～GB4789.31—2010，这个标准只是食品检查的一般标准，它带有很大的局限性。因为环境的不同，对结果的影响具有不确定性，所以，应该对食品卫生标准进行增补。
参考文献
[1]国家药典委员会.中国药典（二部）[S].2010.
[2]卫生部.GB/T4789.1～4789.31-2010.
[3]汪穗福，张新妹，蔡芷荷.微生物验证技术[M].中国医药出版社.
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