动物染色体标本的制备_秋水仙素阻断细胞分裂法

实验用品

器具：显微镜、培养皿、手术剪、镊子、冷冻载片、滴管

试剂：秋水仙素、生理盐水、甲醇、冰醋酸、低渗液、PH6.8 磷酸缓冲液、Giemsa 染色液

材料：蟾蜍

实验方法步骤

1. 前处理 实验前3－4 小时，按每克体重3ug 剂量给蟾蜍的腹腔注射秋水仙素；

2. 取材 打开蟾蜍腹腔，截取1－2cm 长的一段小肠（以十二直肠为好），用见到剖开成片状，在生理盐水中洗净；

3. 低渗 将洗净的小肠投入到盛有5mL 低渗液的小试管中，在37℃水浴下处理30 分钟以上；

4. 固定 弃去低渗液，加入新配制的甲醇（3）：冰乙酸（1）固定液约5ml，静止固定40分钟左右；

5. 解离 弃去固定液，加入约2ml60％的冰乙酸，轻轻摇动，使解离的细胞充分散开，5 分钟后弃去小肠，即得细胞悬浮液；

6. 滴片 吸取少许细胞悬浮液，在适当的高度滴3－4 滴于冰冷的载片上，迅速吹斜气；

7. 干燥 滴片自然风干或吹风机吹干；

8. 染色 在载片上滴十滴磷酸缓冲液，再滴一滴Giemsa 染液，橡皮球轻轻吹均匀，染色30 分钟左右；

9. 观察 吹干后在显微镜下观察。