梨离体叶片再生实验
实验概要
试验研究了基本培养基、激素配比、细胞分裂素、生长素、培养基添加物、蔗糖浓度、pH值及叶龄与接种方式对梨离体叶片不定芽再生的影响，优化了再生条件，建立起了高效、稳定的离体叶片再生体系。
实验材料
金花和丰产两种梨树的离体叶片。
实验步骤
1. 培养基的配制
试验所用的培养基为MS (Murashige & Skoog, 1962), NN69 (Chu et al., 1975), C (Pinet-Leblay et al., 1992), LE (Quoirin & Lepoivre, 1977)等，均为固体（有特殊说明者除外）。各种培养基均参照参考文献记述的方法配制。
2. 无菌苗体系的建立
取经过休眠的枝条，用自来水冲洗干净表面尘土，置于25±2℃的培养室内水培催芽。萌发后，将枝条剪成单芽茎段，用添加吐温-20的自来水冲洗30min。然后在超净工作台上用70%的酒精灭菌15s，再用0.1%的升汞溶液灭菌8-10min，最后用无菌水冲洗4-5遍。切取刚萌发的芽接种于MS BA1mg/L IBA0.2mg/L启动培养基上，待芽长成约25px左右的新梢时切下转移到增殖培养基培养，所保存的材料每4周在相同的培养基上继代1次。灭菌前把所有培养基的pH值用1M的HCl或NaOH调节为5.6，然后在121℃、131Kpa的条件下灭菌20min。培养温度为25±1℃，光照强度2500Lx，光照16h、黑暗8h。
3. 离体叶片再生
从转移生长20d左右的无菌苗顶部，摘取刚展开幼嫩叶片，用无菌刀垂直于叶片中脉横切伤，使叶片产生多个伤口，然后把叶片接种在不同的诱导培养基上。分析基本培养基对再生的影响。所有培养基中均含0.6%琼脂，3%蔗糖（蔗糖浓度试验除外）。接种后先黑暗处理，然后转移到光下培养，黑暗处理分4个水平（0、10、15、20d）。培养条件同上。
4. 再生植株的增殖、生根和移栽
将不定芽剪切成0.5-25px的茎段，接种到MS附加不同激素种类及浓度的增殖培养基上，进行增殖培养。将大于25px的新梢转接到不同的生根培养基上诱导生根。
