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血清脂蛋白的离心分离方法

2020.5.11

    利用不同容量的角式转头及很容易配制的梯度液,在各种型号的超速离心机上都能得到满意的分离结果。下面举了几个分离实例,实际上还可以应用于各种型号各种容量的固定角式转头。 

(一)梯度液

 

A液:11.40gNacl,0.1g EDTA-Na2,置于1000ml量筒中加入500ml重蒸水及1

ml 1N NaOH,混匀至全部溶解。加重蒸水至1000mlzui后再加3ml重蒸水(Nacl:0.195mol)。终密度1.006g/cm3,PH10.37。

B液:加24.98g NaBr 到100ml A液中。终密度1.182g/cm3。(Nacl:0.195mol, NaBr:7.65mol),PH9.72。

C液:加78.32g NaBr 到100ml A液中。终密度1.478g/cm3。(Nacl:0.195mol, NaBr:7.65mol),PH8.86。

(二)离心机及转头

• 离心机:Hitachi CP-MX系列超速离心机或其他类似机组。

Hitachi CS-150GXL微量超速离心机。

• 转头,离心管;S 140 AT:140,000rpm,1,050,000×g,10×2ml,K=5,1PC厚壁管。

S 80 AT3:80,000rpm,415,000×g,8×8ml,K=23,6PC厚壁管。

S 70 AT:70,000rpm,505,000×g,8×40ml,K=44,40PA管。

(三)血浆-血球分离:

全血,角转头或甩平转头3000rpm×20min,沉淀为血细胞,上清血浆待用。

(四)乳糜粒分离

离心参数:各种转头均可用,4×106(g×min),10℃

梯度液:离心管下部3/4容积为血浆,上部1/4容积为0.15MNacl+0.3MEDTA。PH7.4。

离心结果:乳糜粒上浮,离心管倾斜,吸管贴管壁慢吸出(约占血浆容积的2~6%。禁令12小时以上供血者血浆中乳糜含量很低,食后供血者含量较高。

(五)血清脂蛋白分离

VLDL分离(ρ<1.006g/cm3

转头

离心管内液体分布

离心参数

结果

S140AT

(CS-150GXL机组)

下部600μl血浆

上部300μl A液

140,000rpm×50min

16℃

加速:5

减速:7

可见明显分层上部约1/3VLDL吸出

S80AT3

(CS-150GXL机组)

下部3.4ml血浆

上部1.7mlA液

80,000rpm×4.5hrs

16℃

加速:5

减速:7

同上

P70AT

(CP-MX机组)

下部24ml血浆

上部11.7ml A液

70,000rpm×8hrs

16℃

加速:5

减速:7

同上

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

LDL(含IDL)分离(1.006g/cm3<ρ<1.063g/cm3

 

转头

离心管内液体分布

离心参数

结果

S140AT

(CS-150GXL机组)

*次离心后上部VLDL取出,下部600μl移入另一离心管,加入300μl B液,充分混合

140,000rpm×80min

16℃

加速:9 减速:7

上部1/3体积LDL+IDL吸出

S80AT3

(CS-150GXL)

*次离心后上部VLDL吸出,,下部3.4ml移入另一离心管,加入1.7ml B液并充分混合

80,000rpm×5.5hrs

16℃

加速:9减速:7

上部1/3体积LDL+IDL吸出

P70AT

(CP-MX系列超速机或类似机型)

*次离心后上部11.7ml吸出,下部约24ml 移入另一离心管,加入11.7ml B液,充分混合

70,000rpm×10hrs

16℃

加速:9 减速:6

上部1/3体积LDL+IDL吸出

 

HDL分离(1.063g/cm3<ρ<1.21g/cm3

 

转头

离心管内液体分布

离心参数

结果

S140AT

(CS-150GXL机组)

第二次离心后吸出上部300μl后,下部600μl移入另一离心管,加入300μl C液,充分混合

140,000rpm×140min

16℃

加速:9

减速:7

可见较明显分层,

上部为HDL,下部为血清白蛋白及球蛋白

S80AT3

(CS-150GXL机组)

第二次离心后吸出上部约1.7ml、下部3.4ml移入另一离心管,加入1.7ml C液,充分混合

80,000rpm×8小时

16℃

加速:9

减速:7

可见较明显分层,

上部为HDL,下部为血清白蛋白及球蛋白

P70AT

(CP-MX系列机或其他类型机组)

第二次离心后吸出上部1/3、下部2/3移入另一离心管,加入约12ml C液,充分混合

70,000rpm×15小时

16℃

加速:9

减速:6

可见较明显分层,

上部为HDL,下部为血清白蛋白及球蛋白

 


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