3-磷酸甘油醛脱氢酶的测定

实验方法原理

GAPDH，D-磷酸甘油醛；NADP+ 氧化还原酶（磷酸化）。

D-3-磷酸甘油醛 ＋ NAD＋⇌ 1，3-磷酸甘油醛＋ NADH ＋ H＋

酶的实验既可以在正反应方向也可以在偶联后的逆反应方向进行。正反应中，必须加入不稳定且很昂贵的 DL-3-磷酸甘油酸。

实验材料 3-磷酸甘油醛脱氢酶溶液

试剂、试剂盒 三乙醇胺 · HClDL-磷酸甘油酸NAD+砷酸二氢钾

仪器、耗材 分光光度计

实验步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.98 ml 实验混合物

0.02 ml 酶溶液

在 25℃ 时，于 340 nm 处吸收值降低。NADPH 的吸收系数 ε340＝6.3×103 l/（mol·cm）。

注意事项

其他

试剂：

0.1 mol/L 三乙醇胺 · HCl/NaOH pH 7.6（三乙醇胺 · HCl，Mr＝185.7；溶解 18.6 g 于 800 ml H2O 中，用 1 mol/L NaOH 调节至 pH 7.6，补充到 1 L）

0.3 mol/L DL-磷酸甘油酸（Mr＝170.1；不稳定，水状溶液 50 mg/ml）

0.1 mol/L NAD+（游离酸，Mr＝663.4；663 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L 砷酸二氢钾（Mr＝180.0；180 mg 溶于 10 ml 水中）