蛋白质印迹法实验结果“背景过高”的原因及解决办法
可能原因 | 验证或解决办法 |
|---|---|
膜没有完全均匀湿透 | 使用100%甲醇浸膜5~10min |
洗膜不充分 | 增加洗液体积和洗涤次数 |
阻断不充分 | 增加封闭液孵育时间，或者提高温度选择合适的封闭试剂（脱脂奶粉、酪蛋白等） |
二抗浓度过高 | 降低二抗浓度 |
检测过程中膜干燥 | 保证充分的反应液，避免出现干膜现象 |
曝光过度 | 缩短曝光时间 |
抗体与阻断蛋白有交叉反应 | 检测抗体与阻断蛋白的交叉反应性，选择无交叉反应的封闭剂。洗涤液中加入Tween-20可减少交叉反应 [2] |
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可能原因 | 验证或解决办法 |
|---|---|
膜没有完全均匀湿透 | 使用100%甲醇浸膜5~10min |
洗膜不充分 | 增加洗液体积和洗涤次数 |
阻断不充分 | 增加封闭液孵育时间，或者提高温度选择合适的封闭试剂（脱脂奶粉、酪蛋白等） |
二抗浓度过高 | 降低二抗浓度 |
检测过程中膜干燥 | 保证充分的反应液，避免出现干膜现象 |
曝光过度 | 缩短曝光时间 |
抗体与阻断蛋白有交叉反应 | 检测抗体与阻断蛋白的交叉反应性，选择无交叉反应的封闭剂。洗涤液中加入Tween-20可减少交叉反应 [2] |
