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荧光淬灭原理

2023.9.19

荧光淬灭原理如下:

①因荧光物质的分子和熄灭剂分子碰撞而损失能量;

②荧光物质的分子与熄灭剂分子作用生成了本身不发光的的配位化合物;

③溶解氧的存在,使得荧光物质氧化,或是由于氧分子的顺磁性,促进了体系间跨越,使得激发单重态的荧光分子转变至三重态;

④当荧光物质浓度过大时,会产生自淬灭现象.

又称荧光熄灭或萃灭,是指导致特定物质的荧光强度和寿命减少的所有现象。

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引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂。如,卤素离子、重金属离子、氧分子以及硝基化合物、重氮化合物、羧基和羰基化合物均为常见的荧光熄灭剂。

荧光猝灭是荧光物质分子与溶剂分子之间发生猝灭,荧光猝灭分为静态猝灭和动态猝灭。利用某种物质对某一种荧光物质的荧光猝灭作用而建立的对该猝灭剂的荧光测定方法,即为荧光猝灭法。

荧光分子本身浓度增大使其荧光猝灭的现象称为浓度猝灭或自猝灭。由于荧光的再吸收、荧光物质发生化学变化而观察不到荧光的现象一般不称为荧光猝灭。在利用荧光进行定量、液体闪击计数等包含荧光过程的测定方法中,一定要注意溶剂、共存杂质、氧气等猝灭剂的影响。

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标记样品的荧光淬灭是在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察时遇到的主要问题。由于激光扫描共聚焦显微镜具有更强的功率和聚焦更准确的光束,与普通荧光显微镜相比,标本的光漂白作用更为明显,荧光素的荧光可在连续观察过程中逐渐减弱或消失。

因此,应考虑使用抗荧光淬灭剂(抗荧光衰减剂)。常用抗荧光淬灭剂有P-苯二胺(Para-phenylene diamine,PPD)、n-丙基没食子酸盐(propyl gallate,NPG)、1,4-二偶氮双环[2,2,2)-辛烷(1,4-diazobicyelo(2,2,2)-octane,DABCO)等。


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